分类： 生物学 >> 植物学 >> 应用植物学 提交时间： 2021-12-19 合作期刊: 《广西植物》
摘要： 为筛选紫玉兰‘红元宝’（Magnolia liliflora ‘Hongyuanbao’）二次花芽分化阶段稳 定表达的内参基因，该文以‘红元宝’不同花芽分化时期的花芽、叶为材料，基于转录组 数据，筛选出8 个候选内参基因：泛素酶基因（UBC）、肌动蛋白（ACT）、微管蛋白β 链（β-TUB）、微管蛋白β-5 链（β-TUB5）、微管蛋白α-3 链（α-TUB3）、磷酸烯醇丙酮 酸羧化酶（PEPC）、酰基载体蛋白2（ACP2）、酰基载体蛋白3（ACP3）。运用Primer Premier 5 设计引物，简单克隆和熔解曲线验证引物特异性；利用qRT-PCR 技术检测各个 候选内参基因的表达情况，结合GeNorm、NormFinder、BestKeeper 软件和RefFinder 在 线工具综合评估其表达稳定性，并通过目的基因TFL1 的表达分析验证其可靠性。结果表 明：8 个候选内参基因条带位置正确，熔解曲线呈单一峰，说明引物特异性良好；综合4 个软件的分析结果发现，β-TUB、β-TUB5 和α-TUB3 是‘红元宝’不同花芽分化时期较为 稳定的内参基因，而UBC 和ACT 为稳定性最差的内参基因；以单个内参基因和β-TUB5、 α-TUB3、β-TUB 组合为参照对TFL1 基因进行相对表达量分析，结果显示，β-TUB5、α- TUB3、β-TUB 及其组合的相对表达量趋于一致，而ACT 和UBC 并未对目的基因的表达 量进行有效的标准化。因此，β-TUB、β-TUB5 和α-TUB3 可作为‘红元宝’二次花芽分化 研究中稳定表达的内参基因。该研究结果将为木兰属植物二次成花分子调控机制研究提供 依据。
分类： 生物学 >> 植物学 >> 应用植物学 提交时间： 2021-08-09 合作期刊: 《广西植物》
摘要： UDP-类黄酮 3-O-葡萄糖基转移酶(3GT)是花青素生物合成途径的重要催化酶之一。为研究其在紫玉兰花青素苷合成途径中的作用，该文以紫玉兰品种‘红元宝’(Magnolia liliflora ‘Hongyuanbao’)为材料，根据转录组测序获得的 3GT 序列设计引物，利用 RT-PCR技术克隆花青素苷生物合成途径中的结构基因 Ml3GT1，并对其进行生物信息学和表达模式分析。结果表明：（1）Ml3GT1 基因的 cDNA 序列长度为 1 863 bp，其中最长开放阅读框(ORF)为 1 374 bp，编码一条 457 aa 的肽链，相对分子质量为 49.37 kDa，理论等电点(pI)为 6.04。（2）氨基酸序列比对显示其具备典型的植物次生产物糖基转移酶信号序列(PSPG box)。（3）系统发育分析结果表明，Ml3GT1 蛋白与小苍兰、矮牵牛、番薯等物种的 3GT 蛋白聚在一支。（4）qRT-PCR 结果显示 Ml3GT1 基因的表达具有时空特异性，在花中的表达量最高，在嫩叶和老叶中有少量表达，而在根和茎中几乎不表达；且随着花的发育，Ml3GT1 基因的表达量呈现先降低后升高的趋势，并在盛花期达到最高。上述结果表明，Ml3GT1 可能参与类黄酮 3-O 的糖基化修饰，本研究结果将为木兰属植物花色育种研究奠定基础。
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