摘要: 为筛选紫玉兰‘红元宝’(Magnolia liliflora ‘Hongyuanbao’)二次花芽分化阶段稳
定表达的内参基因,该文以‘红元宝’不同花芽分化时期的花芽、叶为材料,基于转录组
数据,筛选出8 个候选内参基因:泛素酶基因(UBC)、肌动蛋白(ACT)、微管蛋白β
链(β-TUB)、微管蛋白β-5 链(β-TUB5)、微管蛋白α-3 链(α-TUB3)、磷酸烯醇丙酮
酸羧化酶(PEPC)、酰基载体蛋白2(ACP2)、酰基载体蛋白3(ACP3)。运用Primer
Premier 5 设计引物,简单克隆和熔解曲线验证引物特异性;利用qRT-PCR 技术检测各个
候选内参基因的表达情况,结合GeNorm、NormFinder、BestKeeper 软件和RefFinder 在
线工具综合评估其表达稳定性,并通过目的基因TFL1 的表达分析验证其可靠性。结果表
明:8 个候选内参基因条带位置正确,熔解曲线呈单一峰,说明引物特异性良好;综合4
个软件的分析结果发现,β-TUB、β-TUB5 和α-TUB3 是‘红元宝’不同花芽分化时期较为
稳定的内参基因,而UBC 和ACT 为稳定性最差的内参基因;以单个内参基因和β-TUB5、
α-TUB3、β-TUB 组合为参照对TFL1 基因进行相对表达量分析,结果显示,β-TUB5、α-
TUB3、β-TUB 及其组合的相对表达量趋于一致,而ACT 和UBC 并未对目的基因的表达
量进行有效的标准化。因此,β-TUB、β-TUB5 和α-TUB3 可作为‘红元宝’二次花芽分化
研究中稳定表达的内参基因。该研究结果将为木兰属植物二次成花分子调控机制研究提供
依据。