分类： 生物学 >> 植物学 >> 应用植物学 提交时间： 2023-12-24 合作期刊: 《广西植物》
摘要： 乳管是天然橡胶合成和贮存的场所，是由维管形成层细胞分裂分化而来的。次生乳 管的数量与天然橡胶产量直接相关，而这些乳管的数量取决于形成层分化次生乳管的频率 （乳管分化能力），是橡胶树产量育种的主要指标。前期研究中，我们发现组蛋白去乙酰化 酶（HDA）抑制剂曲古抑菌素A（TSA）能诱导橡胶树乳管分化，且组蛋白去乙酰化酶基因 （HbHDA6）能够参与橡胶树乳管分化调控。由于组蛋白乙酰化修饰调控橡胶树乳管分化的 分子机制尚未阐明，该文使用冠菌素（COR）诱导橡胶树形成层分化产生次生乳管的实验 系统，分离形成层组织为材料，构建酵母双杂交cDNA 文库，以HbHDA6 基因为诱饵来筛 选酵母双杂交文库，确定与HbHDA6 相互作用的蛋白。结果表明：（1）利用Gateway 技术 构建的均一化COR 诱导橡胶树形成层组织的酵母双杂交cDNA 文库，初级文库的容量为 6.3×106，总单克隆数为1.2×107，文库重组率为100％；次级文库的容量为7.7×106，总单克 隆数为1.5×107，文库重组率为100％。初级文库和次级文库的插入片段平均长度，分别为 1.1 kb 和1.2 kb。（2）成功构建了筛选HbHDA6 互作蛋白的pGBKT7-HbHDA6 诱饵载体， 并确认无自激活活性。（3）使用该诱饵载体对构建的酵母双杂交cDNA 文库进行筛选，并 通过NCBI_blast 比对和去除重复以后，获得了22 个与HbHDA6 发生互作的蛋白，包括CLP1， ERF3，ERF4，HSP82，LARP6a，APT5，PP2A，FBA6 等。该研究成果为解析组蛋白乙酰 化修饰调控橡胶树乳管分化的分子机制提供理论基础，为转基因改良橡胶树的产胶潜力提供 候选基因，为高性能天然橡胶遗传改良育种提供新线索。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-06-01 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 病原微生物感染对人类健康构成巨大威胁，先天免疫系统是生物体在长期进化过程中建立起来的天然保护系统。 VISA （ MAVS, CARDIF, IPS-1[1,2,3]）是连接胞浆 dsRNA 受体 RIG-I 与下游信号转导通路的一个接头蛋白，研究结果表明 VISA 无论在 TLR3 非依赖的或者 TLR3 介导的抗病毒IFN 信号途径中都具有关键作用，但目前对 VISA 信号转导的详细机制还不十分清楚。更多 VISA 相互作用蛋白的发现以及它们之间的作用机制的研究能完善我们对 VISA 参与的信号转导机制的认识。本实验利用酵母双杂交系统，用 VISA 蛋白的全长做诱饵（ Bait )筛选 293 T 细胞 cDNA 表达文库，并结合免疫共沉淀实验，双荧光素酶报告基因系统验证筛选到的阳性克隆和 VISA 作用的真实性。通过酵母双杂交系统成功筛选到 Sec13L1 候选基因并验证了其与 VISA 的全长蛋白相互作用，在 293 T 细胞中过表达这个基因,研究结果显示 Sec13L1 过表达能促进 VISA 对 IFNβ 的诱导，并存在剂量效应。
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