橡胶树形成层组织的酵母双杂cDNA 文库构建及HbHDA6互作蛋白筛选

分类： 生物学 >> 植物学 >> 应用植物学 提交时间： 2023-12-24 合作期刊: 《广西植物》

张世鑫 吴绍华 杨署光 晁金泉 史敏晶 葛立鑫 蒋毅 田维敏

摘要： 乳管是天然橡胶合成和贮存的场所，是由维管形成层细胞分裂分化而来的。次生乳 管的数量与天然橡胶产量直接相关，而这些乳管的数量取决于形成层分化次生乳管的频率 （乳管分化能力），是橡胶树产量育种的主要指标。前期研究中，我们发现组蛋白去乙酰化 酶（HDA）抑制剂曲古抑菌素A（TSA）能诱导橡胶树乳管分化，且组蛋白去乙酰化酶基因 （HbHDA6）能够参与橡胶树乳管分化调控。由于组蛋白乙酰化修饰调控橡胶树乳管分化的 分子机制尚未阐明，该文使用冠菌素（COR）诱导橡胶树形成层分化产生次生乳管的实验 系统，分离形成层组织为材料，构建酵母双杂交cDNA 文库，以HbHDA6 基因为诱饵来筛 选酵母双杂交文库，确定与HbHDA6 相互作用的蛋白。结果表明：（1）利用Gateway 技术 构建的均一化COR 诱导橡胶树形成层组织的酵母双杂交cDNA 文库，初级文库的容量为 6.3×106，总单克隆数为1.2×107，文库重组率为100％；次级文库的容量为7.7×106，总单克 隆数为1.5×107，文库重组率为100％。初级文库和次级文库的插入片段平均长度，分别为 1.1 kb 和1.2 kb。（2）成功构建了筛选HbHDA6 互作蛋白的pGBKT7-HbHDA6 诱饵载体， 并确认无自激活活性。（3）使用该诱饵载体对构建的酵母双杂交cDNA 文库进行筛选，并 通过NCBI_blast 比对和去除重复以后，获得了22 个与HbHDA6 发生互作的蛋白，包括CLP1， ERF3，ERF4，HSP82，LARP6a，APT5，PP2A，FBA6 等。该研究成果为解析组蛋白乙酰 化修饰调控橡胶树乳管分化的分子机制提供理论基础，为转基因改良橡胶树的产胶潜力提供 候选基因，为高性能天然橡胶遗传改良育种提供新线索。

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