分类： 生物学 >> 植物学 >> 应用植物学 提交时间： 2021-12-19 合作期刊: 《广西植物》
摘要： 为探究过氧化氢酶（catalase，CAT）和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD） 基因家族成员在西藏大花红景天高原恶劣生境适应性中的作用，利用生物信息学和实时荧光 定量 PCR 技术对其 RcCATs 和 RcSODs 基因家族成员的序列和表达模式进行了分析，并构建 RcCAT 和 RcSOD1 的 pYES2.0 表达载体与 pGBKT7 诱饵载体，分别进行了酵母胁迫分析和 拟南芥酵母文库中互作蛋白的筛选。结果显示：（1）大花红景天中共有 2 条 RcCAT 基因， 3 条 RcSOD 基因和 1 条 Cu/Zn SOD 铜伴侣基因 RcCCS。生物信息学分析显示上述基因的氨 基酸序列与其同源基因具有较高的相似性（66.37%~94.51%），且均没有跨膜结构域，RcCATs 位于过氧化物酶体，RcSODs 和 RcCCS 位于细胞质或线粒体。（2）qRT-PCR 结果显示 6 个 基因在根、茎、叶三个器官中均有表达且主要在叶片中表达，低温胁迫和植物激素 ABA 对 基因表达量的影响显著。（3）酵母胁迫结果显示异源表达 RcCAT 和 RcSOD1 基因的阳性酵 母菌株在冷、热、盐、碱、重金属和 H2O2 胁迫下的细胞活力均比 pYES2.0 空载菌株高。（4） 通过酵母双杂交共筛选到4 个与RcCAT 互作明显的基因AtbHLH121（AT3G19860）、AtCPCK2 （AT2G23070）、AtGRP4（AT5G50750）和 AtRAPTOR1B（AT3G08850），3 个与 RcSOD1 互作明显的基因 AtEMB（AT5G11890）、AtMBP2（AT1G52030）和 AtRH8（AT4G00660）。 以上结果表明，大花红景天能够通过 RcCATs 和 RcSODs 基因广泛参与调控其生长发育、胁 迫响应等代谢途径来适应高原恶劣的环境。
分类： 生物学 >> 植物学 >> 应用植物学 提交时间： 2020-10-20 合作期刊: 《广西植物》
摘要： 沙棘油有植物抗氧化、抗炎症及抗肿瘤多种药理作用。为了探讨沙棘果油对.H2O2造成氧化性损伤的细胞生长的影响及其抗氧化性，该研究选择了.H2O2 对.RAW264.7 细胞氧化损伤模型，首先通过.DPPH（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)自由基清除实验检测沙棘果油体外抗氧化能力;再用(3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐)MTT 法和流式细胞仪检测超氧化物阴离子荧光探针（DHE）信号，分别检测不同浓度沙棘果油对.H2O2 损伤细胞的存活率和超氧化物阴离子水平。结果表明：(1)与维生素.C 的抗氧化能力相比，沙棘果油在.DPPH自由基清除实验中当沙棘果油浓度在小于.4.9%时，沙棘果油的抗氧化能力大于维生素.C； (2)MTT法发现，浓度3.125%的沙棘果油对H2O2损伤的细胞存活率显著升高（P<0.01）；(3)DHE检测发现，同一时间点，随着沙棘果油浓度增加，DHE阳性细胞比例显著下降（P<0.01），在不同检测时间随着沙棘果油浓度增加，DHE阳性细胞比例显著升高（P<0.01）。沙棘果油对过氧化氢诱导的RAW264.7细胞氧化损伤模型有一定修复作用，可能与细胞内超氧化物阴离子水平受到抑制有关，它具有抗氧化性损伤的潜能。
分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2018-12-24 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 本试验旨在研究L-茶氨酸对过氧化氢（H2O2）诱导山羊瘤胃上皮细胞凋亡的保护作用。采集42日龄的湘东黑山羊的瘤胃组织进行原代细胞分离、培养、纯化。对照组采用完全培养基，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别在完全培养基中添加800 µmol/L H2O2、4 mmol/L L-茶氨酸+800 µmol/L H2O2、8 mmol/L L-茶氨酸+800 µmol/L H2O2和16 mmol/L L-茶氨酸+800 µmol/L H2O2，每组3个重复。培养12 h后，采用噻唑蓝（MTT）法检测细胞存活率，采用流式细胞术检测细胞周期，采用实时定量PCR法和蛋白质印迹（Western blot）法检测Bax和Bcl-2基因及其蛋白的表达。结果表明：L-茶氨酸能显著提高H2O2损伤的瘤胃上皮细胞存活率（P<0.05），显著增加S期细胞比例（P<0.05），显著降低Bax基因和蛋白表达量（P<0.05），显著提高Bcl-2基因和蛋白表达量（P<0.05），显著提高Bcl-2和Bax基因和蛋白表达量的比值（P<0.05）。结果提示，L-茶氨酸能通过抑制细胞凋亡来有效地保护由H2O2导致的瘤胃上皮细胞损伤；体外条件下，培养液中添加的L-茶氨酸浓度高于8 mm/L时能有效发挥抗凋亡作用。
分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2017-11-07 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 本试验旨在通过研究谷氨酰胺对过氧化氢（H2O2）诱导氧化应激人结肠癌HT-29细胞损伤和凋亡的影响，阐明谷氨酰胺的抗氧化效果和作用机理。HT-29细胞经0（对照组）、0.5、2.0、10.0 mmol/L谷氨酰胺和0.35 mmol/L H2O2分别处理12、24、32 h后，测定细胞的超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量，并采用荧光定量PCR方法分析谷氨酰胺对H2O2诱导的细胞凋亡相关基因的mRNA相对表达量，以及采用Annexin V-FITC/PI双染法对HT-29细胞染色，并用流式细胞仪检测细胞的凋亡情况。结果表明：1)处理24 h后，0.5、2.0 mmol/L Gln组SOD活性显著高于对照组（P0.05）。与对照组比较，0.5 mmol/L Gln组核转录因子κB（NF-κB）mRNA相对表达量显著降低（P<0.05），0.5与2.0 mmol/L Gln组B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）mRNA相对表达量显著提高（P<0.05）。处理24 h后，与对照组比较，0.5、2.0和10.0 mmol/L Gln组Caspase-3、NF-κB和Bax mRNA相对表达量均显著降低（P<0.05），Bcl-2 mRNA相对表达量显著升高（P<0.05）。处理32 h后，与对照组比较，2.0 mmol/L Gln组脂肪酸合成酶（FAS）、Caspase-3、NF-κB、Bax mRNA相对表达量均显著降低（P<0.05），Bcl-2 mRNA相对表达量显著升高（P<0.05）；10.0 mmol/L Gln组FAS、Caspase-3、NF-κB、Bax mRNA相对表达量均显著升高（P<0.05）。3）处理24 h后，与对照组比较，Gln处理使活细胞数量提高了5.32%~11.97%，坏死细胞数量降低了6.75%~12.66%。处理32 h后，与对照组比较，Gln处理使活细胞数量提高了1.39%~7.63%，坏死细胞数量降低了3.40%~4.57%。由此可见，谷氨酰胺可抑制氧化应激反应，降低H2O2诱导的HT-29细胞凋亡。
分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2017-10-23 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 本试验以斜带石斑鱼原代肝细胞为研究对象，以过氧化氢作为刺激源，以肝细胞存活率和抗氧化指标的变化为判断指标，旨在建立稳定的斜带石斑鱼原代肝细胞氧化损伤模型。在原代肝细胞培养液中分别添加0（对照）、100、200、400、600、800和1 000 μmol/L H2O2，使之分别作用2、4、6、8、12和24 h，共42组，每组10个重复，测定肝细胞存活率。在得出适宜过氧化氢作用时间的基础上，使每个浓度的过氧化氢（每个过氧化氢浓度设6个重复）作用于肝细胞适宜时间后，收集肝细胞和培养液测定抗氧化指标，筛选使肝细胞发生氧化损伤的适宜过氧化氢作用浓度。结果显示：800 μmol/L过氧化氢作用肝细胞8 h，斜带石斑鱼肝细胞的存活率降低至61.98%；800和1 000 μmol/L组与其他各组相比，肝细胞超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶（600 μmol/L组除外）和过氧化氢酶活性显著降低（P＜0.05），丙二醛与脂质过氧化物含量显著升高（P＜0.05），但800和1 000 μmol/L组之间差异不显著（P>0.05）。以上结果表明，过氧化氢作用浓度为800 μmol/L、作用时间为8 h，可作为建立斜带石斑鱼肝细胞氧化损伤模型的适宜条件。
分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2017-10-10 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 本试验旨在研究体外培养中硒（Se）对凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）肝胰腺细胞抗氧化能力的影响以及对黄曲霉毒素B1(AFB1)毒性的缓解作用。在体外培养肝胰腺细胞的基础上，设定含不同浓度(0、0.15、0.30、0.45、0.60、0.75 μg/mL)Se的培养液，研究Se对肝胰腺细胞抗氧化能力的影响；另用浓度为1 600 μg/L的AFB1侵染细胞，探究Se对AFB1毒性的缓解作用。结果表明：当Se浓度处于0～0.45 μg/mL时，随着Se浓度的增加，丙二醛（MDA）含量呈现降低趋势，但各个浓度之间并没有显著差异（P>0.05），过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力随着Se浓度的增加而增强，Se浓度为0.45 μg/mL时GSH-Px活力显著要高于其他浓度（除0.30 μg/mL）时（P<0.05）；当Se浓度处于0.45~0.75 μg/mL时，随着MDA含量升高的同时CAT、GSH-Px活力下降。当细胞受到浓度为1 600 μg/L的AFB1侵染后，随着培养时间的增加，MDA含量表现一直升高的趋势，同时CAT、GSH-Px活力都有一定程度的下降；当细胞受到浓度为1 600 μg/L的AFB1和浓度为0.45 μg/mL的Se共同作用后，随着培养时间的增加，MDA含量有一定程度的改善，CAT、GSH-Px活力得到一定程度的恢复。由此可见，在体外培养条件下，浓度为0.45 μg/mL的Se有利于提高凡纳滨对虾肝胰腺细胞的抗氧化能力，且在一定程度上能缓解AFB1对肝胰腺细胞的毒性作用。
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