分类： 生物学 >> 植物学 >> 应用植物学 提交时间： 2024-05-15 合作期刊: 《广西植物》
摘要： 通气组织是水母雪兔子（Saussurea medusa）应对极端环境的适应性结构，其形成 通常伴随着细胞程序性死亡（programmed cell death，PCD）的发生，而细胞的死亡与通气 组织的形成通常受到PAD4 基因（Phytoalexin deficient 4）的调控，但PAD4 如何调控水母雪 兔子通气组织形成的机制仍不明确。本研究以水母雪兔子为试验材料，利用同源克隆和 RACE 技术克隆了通气组织形成相关基因SmPAD4，对其序列、系统进化、表达和亚细胞定 位等进行分析，并采用hi-1IL PCR 技术扩增其启动子，以探讨该基因在环境适应中的功能。 结果表明:（1）SmPAD4 基因cDNA 全长为2 047（GenBank 登录号为OR766038），包括1 866 bp 的开放阅读框，编码621 个氨基酸，分子式（C3163H4906N848O910S26），该蛋白为碱性 亲水性不稳定蛋白。（2）系统进化树分析显示，SmPAD4 与刺苞菜蓟（Cynara cardunculus） CcPAD4 的氨基酸序列相似度最高。（3）扩增出1 049 bp 的SmPAD4 启动子序列，包含有 光响应元件、低氧应答元件、干早、生长素应答元件等顺式作用元件。（4）实时荧光定量 分析显示，SmPAD4 基因在根、茎和叶中均有表达，且在叶中的表达量最高；在紫外和低氧 胁迫下SmPAD4 基因在叶和茎中表达量均上调，根中表达量下调。（5）亚细胞定位显示， SmPAD4 分布于细胞核、细胞膜和叶绿体。该研究表明，SmPAD4 基因拥有独特的蛋白结构 域，并且响应低氧和紫外两种环境胁迫，在通气组织的形成以及对逆境胁迫的响应中具有重 要作用，为进一步探究SmPAD4 基因在水母雪兔子环境适应过程中的作用提供理论依据。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-12-20 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： “一带一路”贯穿亚欧非大陆，联结活跃的东亚经济圈和发达的欧洲经济圈，以及中间经济发展潜力巨大的广大腹地国家与地区，“一带一路”战略将对中国未来国内外的政治、经济、文化、科技发展产生重大深远影响。本报告分析了“一带一路”沿线国家的科技发展基础条件，研究了“一带一路”沿线国家在生物技术领域取得的基础研究进展和专利技术研发进展的总体情况，综述了“一带一路”沿线国家生物技术产业发展现状和国际专利布局情况，并针对中国与“一带一路”沿线国家在生物技术领域进一步深化合作互利共赢提出了发展建议。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-11-21 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的 运用CRISPR/Cas9基因编辑技术，建立miR-362基因敲除的95-D肺癌细胞株，并研究miR-362在肿瘤中的调控作用。方法 针对人源miR-362基因序列设计gRNA，构建px330-gRNA载体；T7E1 assay确定gRNA的有效性。分别扩增miR-362上下游同源臂序列构建donor载体。利用脂质体将CRISPR系统和donor载体共转至人肺癌细胞系95-D，通过同源重组方法将筛选标志基因整合至基因组中，通过流式分选以及qPCR方法检测筛选出的细胞中miR-362表达水平。利用Transwell分析miR-362对细胞运动能力的影响。结果 与95-D细胞相比， 95-D-KnockDown细胞中miR-362表达水平显著降低，且迁移侵袭能力分别下降了53.1%（p=0.0006）和48.3% （p=0.0002）。结论 利用CRISPR/Cas9系统成功构建了miR-362基因敲除的95-D细胞，miR-362可促进细胞的运动能力，为后续研究miR-362在肿瘤中的作用机制和功能奠定了基础。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-11-21 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的 运用CRISPR/Cas9基因编辑技术，建立miR-362基因敲除的95-D肺癌细胞株，并研究miR-362在肿瘤中的调控作用。方法 针对人源miR-362基因序列设计gRNA，构建px330-gRNA载体；T7E1 assay确定gRNA的有效性。分别扩增miR-362上下游同源臂序列构建donor载体。利用脂质体将CRISPR系统和donor载体共转至人肺癌细胞系95-D，通过同源重组方法将筛选标志基因整合至基因组中，通过流式分选以及qPCR方法检测筛选出的细胞中miR-362表达水平。利用Transwell分析miR-362对细胞运动能力的影响。结果 与95-D细胞相比， 95-D-KnockDown细胞中miR-362表达水平显著降低，且迁移侵袭能力分别下降了53.1%（p=0.0006）和48.3% （p=0.0002）。结论 利用CRISPR/Cas9系统成功构建了miR-362基因敲除的95-D细胞，miR-362可促进细胞的运动能力，为后续研究miR-362在肿瘤中的作用机制和功能奠定了基础。
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