Thymidine Kinase 1 (TK1) 重组蛋白的表达、纯化及鉴定

摘要: 为获得具有免疫原性的TK1重组蛋白。通过构建能够表达TK1蛋白的重组菌BL21-pET32a-TK1,采用大肠杆菌pET32a表达系统，优化IPTG浓度、诱导温度、诱导时间使BL21-pET32a-TK1重组菌表达目的蛋白的作用条件最佳。表达产物用镍离子亲和层析纯化获得TK1蛋白，并用SDS-PAGE和western blot进行检测。用TK1重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体，检测蛋白免疫原性。实验结果表明：成功构建能够表达TK1蛋白的重组菌BL21-pET32a-TK1，在37℃条件下，IPTG浓度为0.2mM/L、诱导6h时重组蛋白TK1表达量最高。镍离子亲和层析梯度洗脱在80mM咪唑条件下TK1蛋白纯度最大，灰度分析为87.3%，浓缩后蛋白浓度为5.96mg/ml。用该蛋白制备杂交瘤共获得10株稳定分泌TK1抗体的阳性单克隆细胞株，表明TK1重组蛋白具有较好的免疫原性。本实验成功获得可溶性、抗原活性高、免疫原性强的TK1重组蛋白，为肿瘤科学及临床应用研究提供物质支撑。