分类: 生物学 >> 生物工程 提交时间: 2018-11-25 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要: 人核糖核酸酶抑制因子 (human ribonuclease inhibitor, hRI) 是一种能够调节核糖核酸酶活性的酸性包浆蛋白。通过构建含SUMO、IF2、GST、NusA 、MsyB、Trx和 MBP融合标签的重组表达载体,以大肠杆菌BL21(DE3)作为宿主菌进行自诱导(auto-induction,AI)表达,从而使 hRI 的表达量得以提升。利用MagNi磁珠纯化及电泳分析hRI的表达状况,通过RNase/Sepharose亲和层析获得纯度较高的蛋白。纯化后获得的融合蛋白浓度为2960.513 mg/L,与其它公司的hRI活性进行比较,检测其酶活性约为50 U/μL,并使其成功用于RNA的保护,为NusA-hRI的应用提供理论依据。
分类: 生物学 >> 生物工程 提交时间: 2017-07-24 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要: 为获得具有免疫原性的TK1重组蛋白。通过构建能够表达TK1蛋白的重组菌BL21-pET32a-TK1,采用大肠杆菌pET32a表达系统,优化IPTG浓度、诱导温度、诱导时间使BL21-pET32a-TK1重组菌表达目的蛋白的作用条件最佳。表达产物用镍离子亲和层析纯化获得TK1蛋白,并用SDS-PAGE和western blot进行检测。用TK1重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体,检测蛋白免疫原性。实验结果表明:成功构建能够表达TK1蛋白的重组菌BL21-pET32a-TK1,在37℃条件下,IPTG浓度为0.2mM/L、诱导6h时重组蛋白TK1表达量最高。镍离子亲和层析梯度洗脱在80mM咪唑条件下TK1蛋白纯度最大,灰度分析为87.3%,浓缩后蛋白浓度为5.96mg/ml。用该蛋白制备杂交瘤共获得10株稳定分泌TK1抗体的阳性单克隆细胞株,表明TK1重组蛋白具有较好的免疫原性。本实验成功获得可溶性、抗原活性高、免疫原性强的TK1重组蛋白,为肿瘤科学及临床应用研究提供物质支撑。