基因组重排筛选高产谷氨酰胺转胺酶菌株

分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-07-24 合作期刊: 《中国生物工程杂志》

宋佳雯 田苏 张玉如 王志珍 常忠义 高红亮 步国建 金明飞

摘要： 谷氨酰胺转胺酶（TGase）的产量不足的问题一直限制其工业化生产规模，故采用基因组重排的方法，筛选高产谷氨酰胺转胺酶菌株。通过对不同制备条件下原生质体纯度和形成率的考量，获得制备原生质体的最优条件为以6mg/mL的溶菌酶浓度进行酶解，酶解时间2h。再优化融合条件，以2min紫外灭活和40min热灭活结合的方法挑选出融合子。通过两轮基因组重排，经过96孔板发酵高通量筛选和摇瓶发酵复筛验证，获得了一株产酶达7.12U/mL的茂源链霉菌，相比最初选用菌株的平均酶活提高65.5%。发酵结果显示，酶活提高的原因可能是在重组后原酶成熟更快更彻底，且得到的菌株遗传稳定性良好。证明基因组重排能够有效提高菌株的产酶水平，同时为谷氨酰胺转胺酶产量提高提供理论依据。

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