牛奶乳铁蛋白多克隆抗体的制备、纯化及定量检测

摘要: 本试验旨在制备高纯度和特异性的牛奶乳铁蛋白多克隆抗体，为鉴定并定量检测牛奶样品中及奶牛乳腺组织中合成的乳铁蛋白提供试验材料。选用4只健康新西兰大白兔，初次免疫乳铁蛋白4周后进行加强免疫，每2周加强免疫1次，待血清达到抗体效价后，对兔进行心脏采血并分离血清，利用饱和硫酸铵法和蛋白A树脂纯化抗体，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和免疫印迹（Western-blot）法分别用于鉴定纯化后抗体的纯度和特异性。测定纯化后抗体效价，并绘制抗体抑制曲线。最后利用所得抗体对市售液态奶、奶牛乳腺组织匀浆液、奶粉样品中的乳铁蛋白进行定量检测。结果表明，本试验制备的兔抗牛乳铁蛋白多克隆抗体纯度较高、特异性较强，抗体浓度为11.02 mg/mL，效价达到1:128 000；采用该抗体测定的乳腺组织样品中乳铁蛋白浓度为16.13 μg/g，液态奶中接近于0 μg/g，奶粉中为5.28 μg/g。总之，本试验采用经过饱和硫酸铵法和蛋白A树脂2步纯化后得到了纯度较高、特异性较强的兔抗牛乳铁蛋白多克隆抗体，可以用于牛奶等产品的乳铁蛋白鉴定。