双启动子促进亮氨酸脱氢酶在Bacillus subtilis 中表达及发酵研究

作者： 张玲 ¹ 王男 ¹ 金吕华 ¹ 林荣 ¹ 杨海麟 ¹
作者单位：

1. 江南大学工业生物技术教育部重点实验室，江苏无锡 214122
提交时间：2018-09-13 21:21:17

摘要: 为了促进亮氨酸脱氢酶在Bacillus subtilis中高效表达，采取在质粒pMA5自带的启动子PHpaII之后分别添加诱导型和组成型启动子，考察双启动子对酶表达的影响。选取2种诱导型启动子（Pgrac、Pgl-M1）和4种组成型启动子（P43、Plaps、PHpaII、PamyQ）进行构建表达，其中组成型启动子PamyQ与PHpaII构成的双启动子效果最好，有效地将胞外活性提高到31.24 UmL-1，是单启动子PHpaII的3.4倍。在以上最优双启动子的基础上分别融合Sec途径和Tat途径的4种信号肽，但信号肽与双启动子共同作用并没有获得更高的酶活性。选用酶活最高的双启动子突变菌株Bacillus subtilis 168/pW6（PHpaII-PamyQ）进行7.5 L发酵罐补料发酵产酶研究，LeuDH酶活达到217.96 UmL-1，是摇瓶水平的6.97倍，对工业上产亮氨酸脱氢酶有一定参考价值。

亮氨酸脱氢酶枯草芽孢杆菌启动子信号肽发酵产酶

分类： 生物学 >> 生物工程
引用： ChinaXiv:201809.00119 (或此版本 ChinaXiv:201809.00119V1)
DOI:10.12074/201809.00119V1
CSTR:32003.36.ChinaXiv.201809.00119.V1
推荐引用方式： 张玲,王男,金吕华,林荣,杨海麟.(2018).双启动子促进亮氨酸脱氢酶在Bacillus subtilis 中表达及发酵研究.中国生物工程杂志.[ChinaXiv:201809.00119] (点此复制)

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2018-09-13 21:21:17

ChinaXiv:201809.00119V1

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