分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-07-11 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的：为了制备用于检测小鼠胚胎早期Ucp2基因表达的地高辛标记的特异性RNA探针。方法：提取小鼠胚胎脑组织总RNA，设计引物，通过RT -PCR方法获取Ucp2基因片段，将其克隆到pGEM -T载体。分别利用Sp6、T7和Ucp2特异性引物，PCR扩增获得转录模板，通过Sp6及T7 RNA聚合酶，获得地高辛标记的正义、反义Ucp2 RNA原位杂交探针。检测标记探针的效价后，通过全胚胎原位杂交分析制备探针的特异性和杂交效果。结果：成功获得Ucp2基因正义、反义探针，反义探针能高效灵敏检测到Ucp2基因在小鼠胚胎Ed9.5、Ed10.5神经系统呈现高表达，而正义探针未能检测到表达信号。结论：成功制备了特异高效的地高辛标记Ucp2 RNA 原位杂交探针，为进一步研究Ucp2基因在小鼠胚胎组织中的表达，尤其在神经组织的定位奠定基础。
分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2017-11-08 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 本试验旨在研究饲粮中添加复合植物（含石榴皮、艾叶、南五味子和吴茱萸）提取物替代饲用抗生素对断奶仔猪生长性能和血清指标的影响。试验1：选取8 kg、30日龄左右的断奶仔猪160头，随机分为4组，各组分别在基础饲粮中添加金霉素107 mg/kg＋黄霉素40 mg/kg（对照）及0.05％、0.10%和0.20%的复合植物提取物，每组4个重复，每个重复10头仔猪，试验期28 d。试验2：选取11 kg、40日龄左右的断奶仔猪120头，随机分为3组，无抗组采用基础饲粮，另外2组分别在基础饲粮中添加金霉素67 mg/kg＋黄霉素20 mg/kg（抗生素组）和0.10%的复合植物提取物组，试验期35 d。试验1结果显示：与对照组相比，各复合植物提取物组仔猪平均日增重（ADG）、平均日采食量(ADFI)和料重比（F/G）均无显著变化（P>0.05），且0.10%的添加量具有较好的ADG，比对照组提高2.44％。试验2结果显示：与无抗组相比，0.10%的复合植物提取物可使仔猪ADG显著提高21.39％（P<0.05），使血清中白蛋白（ALB）、胆固醇（CHOL）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）和一氧化氮(NO)含量均显著降低（P<0.05），谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力显著升高（P<0.05），铜蓝蛋白（CER）活力显著降低（P<0.05）；与抗生素组相比，0.10%的复合植物提取物可使仔猪ADG显著提高15.07％（P<0.05），使血清中尿素氮（UN）、LDL-C和NO含量均显著降低（P<0.05）。综上所述，0.10%的复合植物提取物可替代饲用抗生素（金霉素＋黄霉素），提高仔猪的生长性能，具有抗应激和抗氧化功能。
分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2017-11-08 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 从石榴皮中提取的多酚具有抗炎、抗氧化、抗癌等多种生物活性，但是其中的大分子的鞣花单宁如安石榴苷（PG）不能被动物胃肠道直接吸收，需要先水解成小分子物质如鞣花酸（EA）才能被吸收进入血液来发挥其生物功能。本试验利用单宁酶将石榴皮多酚中的大分子单宁（相对分子质量>500）水解为小分子酚酸，旨在优化酶解工艺及产物纯化工艺，阐明酶解前后石榴皮多酚在成分上的变化，为石榴皮多酚作为促进动物健康的功能性饲料添加剂的开发利用提供基础数据。通过比较单宁酶水解前后石榴皮多酚的高效液相色谱指纹图谱，确定PG降解率和EA生成率为水解程度检测指标后，利用单因素试验和正交试验优化酶解条件。通过静态吸附和动态吸附试验确定大孔树脂纯化条件，并用液相色谱-质谱联用技术鉴定酶解前后石榴皮多酚在成分上的变化。结果显示：最佳酶解条件为pH 5.2、温度45 ℃、加酶量30 mL/g底物、底物浓度4 g/L，时间16 h。最佳酶解产物纯化条件为D101型大孔树脂，95%乙醇为洗脱剂，上样体积为300 mL，洗脱体积为120 mL。高效液相色谱检测显示原石榴皮多酚中含有43.64%的PG（相对分子质量1 084）、4.85%的EA（相对分子质量302），酶解产物中PG含量为0.00%、EA含量为45.73%。原石榴皮多酚中分析出7种主要多酚化合物，质荷比（m/z）分别为1 083、1 083、783、757、633、401、300，相对分子质量分布在302～1 084；酶解产物中分析出4个主要多酚化合物，m/z分别为600、300、291、247，相对分子质量分布在248～602。本试验利用单宁酶将含大量以PG为主的鞣花单宁的石榴皮多酚水解成富含小分子多酚EA的酶解产物，并优化建立了最佳酶解条件及酶解产物纯化条件，可为石榴皮多酚的开发及其在饲料生产中的应用提供基础数据。
分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2017-10-11 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 本试验以体外培养的仔猪空肠上皮细胞（porcine small intestinal epithelial cell from jejunum,IPEC-J2）为研究对象，研究了猪胰高血糖素样肽-2（porcine glucagon-like peptide-2,pGLP-2）对紧密连接蛋白表达的调节及其信号传导机制。培养液中分别添加10-9 mol/L pGLP-2（pGLP-2组）和10-9 mol/L pGLP-2、10 µmol/L U0126（pGLP-2+U0126组），对照组不添加以上试剂，每组3个重复，每个重复1个培养孔。测定IPEC-J2胞质紧密黏连蛋白-1（zonula occludens-1,ZO-1）、occludin、claudin-1以及细胞外信号调节激酶1/2（extracellular regulated kinase1/2,ERK1/2）蛋白表达量。结果表明：与对照组相比，IPEC-J2细胞培养液中添加pGLP-2显著增加了ZO-1、occludin、claudin-1以及p42-ERK1/2、p44-ERK1/2的蛋白表达量（P<0.05）；与pGLP-2组相比，在IPEC-J2细胞培养液中加入ERK1/2的抑制剂U0126，显著降低了ZO-1、occludin、claudin-1以及p42-ERK1/2、p44-ERK1/2的蛋白表达量（P<0.05）。综合得出，ERK1/2通路是pGLP-2调控肠道上皮细胞紧密连接蛋白表达的一条重要信号通路。
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