分类： 生物学 >> 植物学 >> 应用植物学 提交时间： 2023-07-13 合作期刊: 《广西植物》
摘要： 为探究小黄花茶内生真菌种类和种群分布规律以及对植物病原真菌的抑制作用，该研 究采用组织分离法对小黄花茶内生真菌进行分离纯化，基于形态学和分子生物学进行鉴定， 结合统计学分析评价其多样性，再通过平板对峙法筛选出具有抑菌活性的菌株。结果表明： （1）从小黄花茶 324 份组织块中分离得到内生真菌 261 株，隶属于 1 门 5 纲 9 目 22 属，其 中优势属包括炭疽菌属（Colletotrichum）、间座壳属（Diaporthe）、拟盘多毛孢属 （Pestalotiopsis），分离频率分别为 21.84%、16.86%、10.34%。（2）研究发现小黄花茶内 生真菌在不同季节分布不同，冬季分离出的菌株数量最多，为 72 株，占 27.59%，分属于16 个属；春季 62 株，分属于 13 个属；夏季 59 株，分属于 15 个属；秋季 68 株，分属于 13个 属；冬季的香农-维纳指数（H′）、辛普森指数（D）、均匀度指数（E）和丰富度指数（M）最 高，春季与冬季内生真菌种类相似性较高，夏季与秋季内生真菌种类相似性较高。（3）小 黄花茶内生真菌不同部位分布不同，茎中内生真菌的分布最多，有 102 株，占 39.08%，分 属于 15 个属；根 61 株，分属于 10 个属；叶 98 株，分属于 15 个属；茎的香农-维纳指数、 辛普森指数、均匀度指数、丰富度指数最高，叶部与茎部内生真菌种类最为相似。（4）平 板对峙结果显示，在35 株供试内生真菌中，有26 株内生真菌至少对1 种植物病原真菌有抑 制作用，占74.29%，其中CJ-II-2、XY-V-3、QY-II-4、QJ-III-2、DJ-I-2 对8 种植物病原真菌 均有不同程度的抑制作用，XY-V-3 对8 种植物病原真菌的抑制效果最佳，抑菌率均高于50%， XY-V-3 和QJ-III-2 对2 株小黄花茶病原真菌的抑菌率高于50%，具备防治小黄花茶自身病 害的潜力。小黄花茶内生真菌多样性丰富，部分菌株表现出较好地抑制植物病原真菌的作用， 为生物防治产品的研发和小黄花茶病害的防治奠定了基础。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-08-29 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的：建立一种高效噬菌体文库构建方法，获得抗鸡卵清蛋白（ovalbumin, OVA）的单链抗体（scFv）噬菌体展示文库，筛选鉴定获得OVA单链抗体。方法：用OVA蛋白免疫Balb/C小鼠，选取血清抗体效价高的小鼠提取脾脏RNA，利用RT-PCR方法扩增获得小鼠重链和小鼠轻链基因。通过无缝连接酶一步将小鼠重链基因、轻链基因和linker DNA连接起来，插入噬菌体表达载体中，构建OVA scFv噬菌体展示文库。测定文库容量，对文库进行富集筛选，ELISA鉴定阳性克隆，测序后构建真核表达载体，转入Expi-CHO悬浮细胞进行真核表达，利用Western blot进行鉴定。结果：成功获得库容量为1.2×107cfu的OVA scFv噬菌体展示文库，并从中筛选出8个阳性克隆，选取效价最高的2号克隆，在Expi-CHO悬浮细胞中表达获得可溶性抗体。结论：本研究建立了一种高效构建scFv噬菌体文库的方法，筛选获得高结合活性的OVA单链抗体，并成功进行了真核表达，为OVA ELISA检测试剂盒的研制奠定了基础。
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