分类： 生物学 >> 植物学 >> 应用植物学 提交时间： 2021-07-20 合作期刊: 《广西植物》
摘要： 为了进一步阐明雷公藤中的主要物质基础，评价其抗肿瘤活性，该文采用了柱层 析、HPLC 等多种分离材料和技术从雷公藤 95%乙醇提取物中分离得到 12 个化合物，并根 据理化性质及波谱数据鉴定了各化合物的结构为,-amyrenone (1)、3β-acetoxyolean-12- en-28-oic acid (2) 、 antriptolactone (3) 、 ω-hydroxypropioquaiacone (4) 、 3-(4-hydroxy-3- methoxyphenyl)-propenal (5)、3-methoxy-4-hydroxy phenylethanol (6)、vanillin (7)、3, 4, 5-三 甲氧基苯酚 (8) 、对羟基苯甲酸 (9)、对羟基苯甲醛 (10)、vanillyl alcohol (11)、2, 6- dimethxy-1, 4-benzoquinone (12)。其中化合物 1，2，5 和 12 为首次在该属植物中分离得 到。采用 MTT 法对 12 个化合物进行了抗 SH-SY5Y 细胞株，K562 细胞株和 Hel 细胞株等 3 种肿瘤细胞系细胞增殖活性的筛选，并对活性较好的化合物 12 进行 Hoechst 荧光染色和 促凋亡作用的检测。结果发现化合物 2，3，5 和 12 具有一定的抗肿瘤活性，其中化合物12 的抗肿瘤活性最为显著（SH-SY5Y 细胞、Hel 细胞、K562 细胞的 IC50 分别为 35.6、 14.3、28.8 μmol·L-1）。该研究进一步丰富了雷公藤的化学成分，且发现了一个具有明显抗 肿瘤活性的单体物质，为雷公藤的进一步开发提供了科学依据。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-11-26 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的：克隆表达2型猪链球菌中磷酸甘油酸激酶（PGK）并对其酶学特性进行测定。方法：采用PCR方法从05ZYH33基因组中扩增出pgk片段，构建重组表达质粒pET28a:pgk，经双酶切及测序验证正确的质粒转化入E.coil BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达，重组PGK蛋白经SDS-PAGE和质谱鉴定并测定其酶学活性。结果：PGK在大肠杆菌中可溶性表达，纯化后得到约43 kDa的重组PGK蛋白，其酶促反应最适温度为25 ℃，最适pH为7.5，2型猪链球菌PGK的酶活性为75 U/mL，PGK相对于3-PGA的Km值为1.744 mmol/L，Vmax为0.143 mmol/L/min，相对于ATP的Km值为2.266 mmol/L，Vmax为0.318 mmol/L /min。结论：利用原核表达系统成功地表达了2型猪链球菌中的PGK，并获得了活性较好的重组PGK，酶学检测发现纯化的PGK具有良好的体外活性，为进一步研究该病在2型猪链球菌致病及代谢机制奠定了基础。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-11-26 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的：克隆表达2型猪链球菌中磷酸甘油酸激酶（PGK）并对其酶学特性进行测定。方法：采用PCR方法从05ZYH33基因组中扩增出pgk片段，构建重组表达质粒pET28a:pgk，经双酶切及测序验证正确的质粒转化入E.coil BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达，重组PGK蛋白经SDS-PAGE和质谱鉴定并测定其酶学活性。结果：PGK在大肠杆菌中可溶性表达，纯化后得到约43 kDa的重组PGK蛋白，其酶促反应最适温度为25 ℃，最适pH为7.5，2型猪链球菌PGK的酶活性为75 U/mL，PGK相对于3-PGA的Km值为1.744 mmol/L，Vmax为0.143 mmol/L/min，相对于ATP的Km值为2.266 mmol/L，Vmax为0.318 mmol/L /min。结论：利用原核表达系统成功地表达了2型猪链球菌中的PGK，并获得了活性较好的重组PGK，酶学检测发现纯化的PGK具有良好的体外活性，为进一步研究该病在2型猪链球菌致病及代谢机制奠定了基础。
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