分类： 生物学 >> 植物学 >> 应用植物学 提交时间： 2018-10-26 合作期刊: 《广西植物》
摘要： 海南龙血树是国产血竭的主要基源植物，其血竭主要化学成分为类黄酮化合物。目前对血竭的研究集中在化学成分及药理活性分析，对血竭形成的分子机制并不了解。WD40转录因子在类黄酮的积累中具有重要的调控作用。本研究根据海南龙血树转录组数据，利用RT-PCR技术在海南龙血树中克隆了一个WD40基因DcWD40-1，该基因包含一个1 353 bp的开放阅读框，编码450个氨基酸，蛋白质分子量50.77 kD，理论等电点5.71。生物信息学分析显示，DcWD40-1属于WD40蛋白家族成员，具有5个保守的WD40结构域，和其他植物WD40蛋白同源性高，保守性强。利用Genome Walking方法分离了1 503 bp的DcWD40-1启动子序列，该区域具有典型真核生物启动子结构特征，并含有多个应答激素和胁迫的响应元件。表达分析显示，血竭诱导剂能够诱导DcWD40-1的表达，DcWD40-1的变化与血竭形成及类黄酮积累正相关。此外，DcWD40-1也能对茉莉酸甲酯、细胞分裂素、油菜素内酯和UV-B处理做出积极响应。本结果为进一步研究DcWD40-1在类黄酮生物合成中的潜在功能和作用机制奠定基础。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-09-21 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 甾体药物是仅次于抗生素的全球第二大类药物，具有抗炎、抗过敏、调节内分泌等重要功效。对甾体母核特定位点进行有效的氧化修饰，是引入药效活性的关键。研究表明，P450酶是催化甾体特异性氧化的一类关键酶家族。目前，电子传递效率和催化特异性是限制P450酶催化功能的重要因素，会导致目标甾体产物产量低、副产物积累严重等问题。因此，本文将围绕提高P450酶的催化效率及特异性方面的研究工作，系统综述工程化P450催化甾体类物质的方法策略和相关研究进展，并对催化甾体化合物的P450酶的设计和优化的未来发展进行展望，为该方面工作的深入研究提供指导。
分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2017-10-23 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 本试验旨在研究不同越冬饲料对蜜蜂中肠消化酶活性、组织发育状态以及抗氧化酶基因表达的影响，以便为广大蜂农选择越冬饲料提供参考。在2015年10月底选取群势相当的本地意大利蜜蜂（Apis mellifera L.）越冬蜂群（群内无储备越冬饲料脾）9群（5框蜂/群），随机分为3个试验组（3群/组），从11月2号开始分别以蜂蜜(蜂蜜组)、果葡糖浆(果葡糖浆组)和白砂糖水（白砂糖：水=2：1，蔗糖组）为越冬饲料进行饲喂，饲喂至11月下旬蜂群进入越冬期。整个试验期为2015年10月底至2016年3月初。分别于越冬前（11月初）、越冬中期（1月初）和越冬后（3月初）采集蜜蜂中肠，测定中肠消化酶（淀粉酶、蔗糖酶和蛋白酶）活性，在越冬中期采集蜜蜂中肠用于中肠组织发育状态和抗氧化酶基因[超氧化物歧化酶1（Sod1）、超氧化物歧化酶1（Sod2）和过氧化氢酶（CAT）]相对表达量等指标的检测。结果表明：在越冬中期，果葡糖浆组和蜂蜜组的蜜蜂中肠内淀粉酶活性显著高于蔗糖组（P0.05）。在越冬中期，果葡糖浆组的蜜蜂中肠内蛋白酶活性显著高于蔗糖组和蜂蜜组（P<0.05）。蜂蜜组和蔗糖组的蜜蜂中肠肠壁厚度极显著大于果葡糖浆组（P<0.01），且蜂蜜组和蔗糖组的蜜蜂中肠隐窝深度也极显著大于果葡糖浆组（P<0.01）。在越冬中期，蔗糖组的蜜蜂中肠Sod1基因的相对表达量显著高于蜂蜜组和果葡糖浆组（P＜0.05）。由此得出，蜂蜜能够提高越冬蜂中肠消化酶活性，蜂蜜和白砂糖有利于越冬蜂中肠组织的发育，而且白砂糖能够提高越冬蜂中肠抗氧化酶基因的表达。因此，蜂蜜和白砂糖比果葡糖浆更适合作为蜜蜂的越冬饲料。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-07-24 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 8二甲基异戊烯基柚皮素（8DN）作为生产黄酮类类药物淫羊藿苷的重要前体，在医药合成领域具有重大应用潜力。由于其合成路径及相关基因的复杂性，目前主要通过饲喂8DN的直接前体(柚皮素，异黄腐酚等）的方式合成8DN，而在生物体内全合成8DN的的研究工作还未见报道。为了实现8DN在酿酒酵母体内的生物全合成，该研究通过组合筛选8DN前体物柚皮素合成所需的多种外源基因（TAL，4CL，CHS，CHI），获得30株柚皮素生产菌，发现不同来源的基因组合引起柚皮素产量的明显差异（0.37mg/L-22.33mg/L）。并且利用Delta位点将较优的基因组合整合至酵母基因组，实现了稳定的柚皮素高产菌株（SyBE_Sc02050031）构建。在此基础上进一步导入带有苦参来源的异戊烯基转移酶基因（N8DT）多拷贝质粒，实现8DN合成的完整反应过程，8DN的摇瓶发酵产量达到36.7μg/L。另外通过关键限速酶N8DT的序列优化策略，发现截断定位信号肽序列的N8DT明显提高了从柚皮素到8DN这一关键反应的催化效果，8DN的产量提高到52.6 μg/L（144.2%）。该研究首次在酿酒酵母中成功构建高产8DN的生物全合成路径，为在微生物体内合成其他黄酮类天然产物提供了参考，具有重要的指导意义。
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