分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2018-12-24 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 本试验旨在探讨植物乳杆菌对大肠杆菌感染猪肠道上皮细胞（IPEC-J2细胞）形态、存活和免疫应答的影响。在体外条件下，采用吉姆萨和台盼蓝染色方法检测植物乳杆菌对大肠杆菌感染IPEC-J2细胞形态和存活的影响，并采用实时定量荧光PCR方法研究了其对大肠杆菌感染IPEC-J2细胞免疫应答的影响。结果表明：植物乳杆菌能够缓解大肠杆菌引起的IPEC-J2细胞形态损伤。与大肠杆菌处理组相比，植物乳杆菌与大肠杆菌共同处理可显著或极显著降低细胞死亡率（1、2 h，P<0.01；3 h，P<0.05）。植物乳杆菌可显著抑制大肠杆菌引起的IPEC-J2细胞Toll样模式识别受体2（TLR2）（2、3 h，P<0.01）、Toll样模式识别受体6（TLR6）（2 h，P<0.05；3 h，P<0.01）、NOD样模式识别受体2（NOD2）（1 h，P<0.05；2 h，P<0.01）及炎症因子白细胞介素-6（IL-6）（2、3 h，P<0.01）、白细胞介素-8（IL-8）（2、3 h，P<0.01）mRNA的过表达（P<0.05），还可促进IPEC-J2细胞NOD样模式识别受体1（NOD1）mRNA的表达（2 h，P<0.05；3 h，P<0.01）。结果提示，植物乳杆菌能够缓解大肠杆菌引起的IPEC-J2细胞形态损伤及死亡，并可通过调节模式识别受体TLR2、TLR6和NOD2 mRNA的表达缓解大肠杆菌引起的细胞炎症因子IL-6、IL-8 mRNA的过表达。
分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2018-12-24 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 本研究以IPEC-J2细胞为材料，研究不同浓度和时间处理下呕吐毒素（DON）对猪空肠上皮细胞凋亡的影响。通过CCK-8试剂盒检测细胞增殖毒性，筛选出合适的DON作用时间（6、12、24 h）。通过低浓度（200 ng/mL）和高浓度（2 000 ng/mL）DON分别作用IPEC-J2细胞6、12、24 h，检测DON对细胞有丝分裂周期和细胞早期凋亡的影响。结果表明：1）DON对IPEC-J2细胞生长有明显抑制作用，200和2 000 ng/mL DON浓度下，48和72 h的细胞存活率显著低于24 h(P<0.05)；2 000 ng/mL DON浓度下，72 h的细胞存活率显著低于48 h(P<0.05)。2）不同DON浓度对细胞周期影响不同，低浓度DON主要作用于细胞有丝分裂S期，干扰DNA的复制；而高浓度DON主要作用于细胞有丝分裂G2/M期，干扰有关酶与纺锤丝蛋白质的合成。3）DON作用6 h，低浓度DON组和高浓度DON组早期凋亡率和总凋亡率显著高于对照组(P<0.05)；DON作用12 h，高浓度DON组早期凋亡率和总凋亡率显著高于对照组和低浓度DON组(P<0.05)。由此可见，DON抑制了IPEC-J2细胞增殖，低浓度DON使细胞有丝分裂停留在S期，高浓度DON使细胞有丝分裂停留在G2/M期。DON促使细胞早期凋亡，使总凋亡率上升，且促凋亡作用随DON浓度升高而增强
分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2017-10-23 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 本试验旨在研究益生菌大肠杆菌Nissle 1917（EcN）抗逆性能、猪肠上皮细胞黏附率及抑菌效果。采用体外法对EcN进行生长曲线绘制和耐酸、耐胆盐、耐热性能的测定；以猪肠上皮细胞IPEC-J2细胞为体外细胞模型，考察了EcN对该细胞的黏附率以及对致病菌大肠杆菌K88的黏附抑制率；同时通过蛋白质印迹法检测了EcN对IPEC-J2细胞β-防御素-2和Toll样受体4的水平的影响。结果表明：1）EcN对高酸、高胆盐和高温环境具有一定耐受能力。2）EcN对IPEC-J2细胞的黏附作用以对数期最佳，黏附率达33.96%，显著高于迟缓期、稳定期和衰亡期（P<0.05）。3）EcN对致病菌大肠杆菌K88具有良好的抑制效果，黏附抑制率达87.84%。4）EcN还能上调IPEC-J2细胞β-防御素-2和Toll样受体4水平。结果提示，益生菌EcN具有较好的抗逆性能，能够良好地黏附猪肠上皮细胞，对致病菌大肠杆菌K88具有良好的抑制作用。
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