分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2018-12-25 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 本试验通过对鸭肥肝和鹅肥肝的基本营养成分、氨基酸、脂肪酸进行分析和营养评价，旨在比较鸭肥肝和鹅肥肝氨基酸、脂肪酸营养价值及质构特性的差异性。分别选择填饲期为28 d的鹅肥肝和填饲期为14 d的鸭肥肝，采用氨基酸分析仪、气相色谱仪等仪器进行测定分析，比较二者营养价值的差异性。结果表明：1）鸭肥肝中水分、粗脂肪含量极显著低于鹅肥肝（P<0.01），而粗灰分、粗蛋白质含量极显著高于鹅肥肝（P<0.01）。2）鸭肥肝和鹅肥肝的氨基酸种类相同，均未检测到色氨酸，其余氨基酸（除半胱氨酸和脯氨酸）含量均有显著或极显著差异（P<0.05或P<0.01）。鸭肥肝的必需氨基酸指数（EAAI）为64.34，鹅肥肝的EAAI为60.25；鸭肥肝的氨基酸比值系数评分（SRC）为73.34，鹅肥肝的SRC为47.11；鹅肥肝中呈味氨基酸的比例高于鸭肥肝，鸭肥肝中药用氨基酸含量高于鹅肥肝。3）鹅肥肝中不饱和脂肪酸含量为61.70%，饱和脂肪酸含量为39.31%；鸭肥肝中不饱和脂肪酸含量为59.11%，饱和脂肪酸含量为41.25%。鹅肥肝中饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸、多不饱和脂肪酸的比例为5.53:7.69:1.00，鹅肥肝脂肪酸的营养价值优于鸭肥肝。4）鸭肥肝中的铬、铜、铁、磷、含量极显著高于鹅肥肝（P<0.01），鹅肥肝中钙含量极显著高于鸭肥肝（P<0.01）。5）鸭肥肝的硬度极显著高于鹅肥肝（P<0.01），鸭肥肝的黏附性极显著低于鹅肥肝（P<0.01）。由此可见，鸭肥肝氨基酸营养价值高于鹅肥肝，鹅肥肝脂肪酸营养价值高于鸭肥肝；鹅肥肝嫩度好，鸭肥肝硬度高。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-09-20
摘要： 巴斯德毕赤酵母（Pichiapastoris）是近年来发展迅速的一种高效表达的宿主菌。毕赤酵母属甲醇营养型酵母，具有操作简便、易于高密度培养、生长迅速、对翻译后的蛋白进行加工、生产成本低等优点。毕赤酵母表达系统已有20多年的研究开发使用历史，有多种表达载体和改良的宿主菌可供选择，可进行胞内表达或分泌表达。利用基于同源重组的DNA转化系统将基因整合进基因组是目前最重要的基因编辑手段之一，已经被广泛应用于毕赤酵母中；但毕赤酵母面临着筛选标记不足的难题。 在Cre/loxP系统中，当两个loxP位点以顺时针相同的方向放在一段序列之间时，Cre酶能识别并切除该序列，留下一个loxP位点。当使用突变的loxP序列（例如lox71和lox66），当被Cre重组酶识别并进行作用后，会留下一个新的突变的lox72位点，并不会与下次引入的loxP位点进行作用，从而避免了残留的loxP位点与新引入的loxP位点被Cre重组酶识别的可能。 本文通过在毕赤酵母通用质粒pPICZA和pGAPZA的基础上，在博来霉素抗性基因表达盒后融合了诱导表达Cre的表达盒，并在这两个表达盒前后引入了lox71和lox66位点，分别构建了质粒pZACH和pGACH；进而进行筛选标记循坏利用。具体过程如下：1、质粒转化毕赤酵母，使用博来霉素进行抗性筛选得到阳性转化子；2、将阳性转化子接种于含有诱导剂甲醇的YPM培养基中，培养过夜；3、将培养过夜的含菌体的培养基划线于不含抗生素的YPD平板上，培养至酵母单菌落可见；4、将3中的酵母单菌落同时点种于不含抗生素的YPD平板和含博来霉素的YPDZ平板上，如能在YPD平板上生长而不能在YPDZ平板上生长，则说明该菌落的博来霉素抗性表达盒已丢失，再使用PCR鉴定进行验证。整个抗性素标记丢失需要约4-5天。 使用质粒pZACH分别在毕赤酵母中表达了来源于柠檬酸杆菌（Citrobacteramalonaticus）CGMCC 1696的植酸酶和来源于抗辐射不动杆菌（Acinetobacterradioresistens） CMC-1的脂肪酶，这些质粒的抗性素标记丢失效率均大于70%，而且植酸酶和脂肪酶的产量与菌体生长都和使用基础质粒pPICZA进行表达的结果相似。该质粒对外源蛋白表达以及菌体生长并无不良影响。 使用筛选标记循坏利用质粒pZACH和pGACH，可以克服毕赤酵母中筛选标记不足的缺点，便于更好地在毕赤酵母中进行基因改造，从而为毕赤酵母的进一步工业应用提供基础。
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