分类： 生物学 >> 植物学 >> 应用植物学 提交时间： 2020-08-02 合作期刊: 《广西植物》
摘要： 病程相关蛋白（PRs）在植物抗病抗逆过程中发挥重要作用。盐穗木病程相关蛋白基因HcPR10（GenBank：KF673356）来自盐穗木（Halostachys capsica）在600 mmol·L-1 NaCl胁迫下的盐抑制差减文库。为探究盐穗木病程相关蛋白HcPR10发挥生物学功能的机制，通过体外表达和纯化HcPR10重组蛋白，制备特异性的HcPR10多克隆抗体。本研究采用双酶切构建原核重组表达载体pET28a-HcPR10，转化至大肠杆菌（Escherichia coli）BL21诱导表达，通过正交分析优化重组蛋白可溶性诱导表达的条件，利用Ni-NTA亲和层析柱纯化融合蛋白，免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体，基于纯化获得的His-HcPR10重组蛋白和转HcPR10拟南芥总蛋白，分别利用ELISA和Western Blotting检测抗血清效价和特异性。结果表明：成功构建重组表达载体pET28a-HcPR10；正交结果显示诱导温度27 ℃，诱导转速200 r·min-1，IPTG浓度0.7 mmol·L-1，诱导时间6 h条件下可诱导表达大量可溶性目的蛋白；ELISA检测抗HcPR10血清效价达1:243 000，Western Blotting印迹结果显示制备的抗血清可以与重组蛋白和转基因拟南芥（Arabidopsis thaliana）中异源表达的HcPR10蛋白特异性结合。获得了效价高、特异性强的盐穗木病程相关蛋白HcPR10抗血清，为进一步研究HcPR10的亚细胞定位及生物学功能奠定了基础。
分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2017-11-08 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 本试验旨在探寻促进奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)乳蛋白和乳脂合成的短链脂肪酸(乙酸、β-羟丁酸)和长链脂肪酸（油酸、亚油酸、亚麻酸）的组合添加模式，为调控乳成分合成提供理论依据。BMECs经分离、纯化后，选取第2代细胞，分为5组，对照组不添加脂肪酸，Ⅰ组和Ⅱ组添加的乙酸、β-羟丁酸浓度比例均为2.0（9.60 mmol/L）∶1.0（4.80 mmol/L），油酸、亚油酸、亚麻酸的浓度比例分别为2.0（17.30 μmol/L）∶13.3（115.05 μmol/L）∶1.0（8.65 μmol/L）和9.6（75.20 μmol/L）∶7.4(58.00 μmol/L)∶1.0(7.80 μmol/L)；Ⅲ组和Ⅳ组添加的乙酸、β-羟丁酸的浓度比例均为1.0(7.20 mmol/L)∶1.0(7.20 mmol/L)，油酸、亚油酸、亚麻酸的浓度比例分别为2.0∶13.3∶1.0和9.6∶7.4∶1.0，各组添加的短链脂肪酸(SCFA)和长链脂肪酸(LCFA)总浓度为14.541 mmol/L，每组3个重复。培养24 h后，检测细胞相对增殖率（RGR）、甘油三酯(TAG)的合成量以及乳蛋白和乳脂合成相关基因的表达量。结果表明：1）试验组BMECs RGR及TAG的合成量均显著高于对照组(P﹤0.05)；Ⅰ组RGR最高，TAG合成量最多。2）与对照组相比，Ⅱ组显著提高了核糖体蛋白S6激酶1（S6K1）、κ-酪蛋白(CSN3)基因的表达量(P﹤0.05)；Ⅳ组显著提高了真核翻译起始因子4E结合蛋白1（4EBP1）基因的表达量(P﹤0.05)；试验组信号转导和转录激活因子5（STAT5）基因的表达量显著降低(P﹤0.05)。3）与对照组相比，试验组二酰甘油酰基转移酶2(DGAT2)基因的表达量显著提高(P﹤0.05)，脂肪酸合成酶（FASN）基因的表达量显著降低(P﹤0.05)。综上所述，在培养液中添加7.20 mmol/L乙酸、7.20 mmol/L β-羟丁酸、75.20 μmol/L油酸、58.00 μmol/L亚油酸、7.80 μmol/L亚麻酸对BMECs乳蛋白和乳脂合成相关基因的表达量有较好的促进作用。
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