分类： 生物学 >> 植物学 >> 应用植物学 提交时间： 2020-03-24 合作期刊: 《广西植物》
摘要： MYB 转录因子家族是植物中最大的转录因子家族之一，参与植物生长、繁殖和代谢的各个时期。研究发现，MYB 转录因子能通过多种方式参与植物抗逆生长。该研究在水曲柳中克隆FmMYBL2 基因，利用生物信息学分析其结构和表达特征，并构建FmMYBL2 蛋白的系统进化树。对水曲柳幼苗进行低温胁迫、盐胁迫处理以及激素分子诱导处理（包括ABA、IAA、GA3、JA、SA）。分别在0、1、3、6、12、24、48 h取样。利用实时荧光定量PCR 对上述处理样品中FmMYBL2 基因进行定量分析，并分析了FmMYBL2 的时空表达特征。结果表明：克隆得到的FmMYBL2 基因全长为762 bp，编码253 个氨基酸。FmMYBL2 蛋白是亲水性蛋白，氨基酸序列比对表明其与棉花同源关系较近。荧光定量分析表明，FmMYBL2 基因响应低温胁迫和盐胁迫，同时ABA、IAA、GA3、JA、SA 共同调控该基因表达。在低温处理1 h、盐胁迫48 h 时FmMYBL2基因表达量最高，激素诱导后表达量持续波动，但能在短时间内迅速响应。FmMYBL2 基因在根、芽、花、种子中均有表达，雄花中的表达量最高。该研究结果为深入研究MYBL2 基因功能和水曲柳抗逆生长的调控奠定基础。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-07-24 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的：建立谷氨酸依赖型氨基转移酶-谷氨酸脱氢酶偶联反应的96孔板高通量筛选方法，并用于大肠杆菌氨基转移酶WecE突变库的筛选。方法：通过优化偶联指示酶-谷氨酸脱氢酶、信号分子NADH浓度及双酶偶联反应时间，建立了光学法测定氨基转移酶活性的氨基转移酶-谷氨酸脱氢酶偶联反应方法；通过定点饱和突变技术构建了大肠杆菌氨基转移酶WecE的突变库；采用96孔板高通量初筛、摇瓶复筛获得了高活性的转氨酶突变体，并对纯化的突变体进行催化活力分析。结果：建立了谷氨酸依赖型氨基转移酶目标反应与0.5 U/mL L-谷氨酸脱氢酶和0.4 mmol/L NADH信号指示反应相偶联的筛选方法；构建了氨基转移酶WecE Tyr 321饱和突变库，通过96孔板高通量筛选，获得了催化活性比野生型提高3.4倍的突变体Y321F。结论：本研究建立了高通量筛选方法，背景干扰小，准确性高，为谷氨酸依赖型氨基转移酶分子进化提供了可行性方案。
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