草鱼乙酰辅酶A羧化酶β基因全长cDNA分子克隆与表达分析

摘要: 本试验采用反转录PCR(RT-PCR)和cDNA末端快速扩增（RACE）技术克隆获得草鱼乙酰辅酶A羧化酶β（ACC2）基因全长cDNA，并采用实时荧光定量PCR技术研究ACC2基因在肝胰脏、脾脏、大脑、前肠、中肠、后肠、肾脏、肌肉、心脏和肠系膜脂肪等组织中的表达，同时，还对饲喂不同脂肪源饲料12周后草鱼肝胰脏和肌肉中以及饥饿再次投喂后3、6、12和24 h肝胰脏中ACC2 mRNA的表达变化进行了研究。结果显示：草鱼ACC2基因cDNA全长7 533 bp，含1个7 149 bp的开放阅读框，编码2 382个氨基酸，ACC2蛋白计算分子质量为268.34 ku，等电点为6.13。草鱼ACC2基因存在可变剪接，形成另外1个同工型（isoforms），比分子质量为268.34 ku的ACC2蛋白少8个氨基酸。ACC2基因在所有检测组织中均有表达，ACC2 mRNA的相对表达量在肌肉中最高，为29.13，在肝胰脏中最低，仅为1.90。肌肉中ACC2 mRNA的相对表达量与大脑、前肠和心脏差异不显著（P>0.05），但显著高于其他组织（P<0.05）。投喂不同脂肪源饲料对草鱼肝胰脏及肌肉中ACC2 mRNA相对表达量无显著影响（P>0.05）；饥饿再投喂后草鱼肝胰脏中ACC2 mRNA相对表达量在12 h达到高峰值，为6.17，之后明显下降，24 h时仅为2.84。本试验成功克隆了草鱼ACC2基因全长cDNA，其主要的功能位点ATP结合位点、生物素结合位点与其他脊椎动物相比基本保守。草鱼ACC2基因主要在肌肉等脂肪分解活跃的组织中表达，投喂不同脂肪源饲料对草鱼肝胰脏中ACC2 mRNA的相对表达量无显著影响；饥饿再投喂后，肝胰脏中ACC2 mRNA的相对表达量在投喂12 h后最高。