体外法研究pH与脂多糖或组胺的交互作用对奶山羊瘤胃上皮细胞紧密连接蛋白mRNA表达量的影响

摘要: 本试验旨在采用体外法研究pH与脂多糖（LPS）或组胺（HIS）的交互作用对奶山羊瘤胃上皮细胞紧密连接蛋白mRNA表达量的影响。选用8只体况良好,体重、泌乳量相近的萨能奶山羊作为瘤胃上皮供体。采用3×3双因素试验设计，山羊屠宰后采集瘤胃上皮，插入到尤斯灌流仪器（Ussing chamber）半室中央，在浆膜侧半室加入5 mL缓冲液，黏膜侧加入配制好的不同处理的培养液5 mL，每个处理3个重复。试验1，因素1为pH，分别为7.4、5.5、5.2；因素2为LPS浓度，分别为0、30、60 kEU/mL LPS。试验2，因素1为pH，分别为7.4、5.5、5.2；因素2为HIS浓度，分别为0、0.5、10.0 ng/mL HIS。采集培养80 min后的瘤胃上皮，测定其紧密连接蛋白Claudin-1、Claudin-4、Claudin-7、Occludin、Zonula occludens-1（ZO-1） mRNA表达量。结果显示：1）pH与LPS的交互作用对Claudin-1、Claudin-7、ZO-1 mRNA表达量影响显著（P<0.05）。表现为与pH 7.4×0 kEU/mL LPS组相比，降低pH或添加LPS均显著降低了Claudin-1、Claudin-7 mRNA表达量（P<0.05），ZO-1 mRNA表达量有整体降低的趋势，但在pH 5.2×60 kEU/mL LPS时最高。2）pH与HIS的交互作用对Claudin-1、Claudin-7、ZO-1 mRNA表达量影响显著（P<0.05）。pH 5.5×0.5 ng/mL HIS组Claudin-1 mRNA表达量最低，但与pH 5.2×0.5 ng/mL HIS组差异不显著（P>0.05）。pH 7.4×10.0 ng/mL HIS组Claudin-7 mRNA表达量显著低于pH 7.4×0 ng/mL HIS组（P<0.05），但与pH 5.5×10.0 ng/mL HIS组差异不显著（P>0.05）。与pH 7.4×0 ng/mL HIS组相比，降低pH或添加LPS有提高ZO-1 mRNA表达量的趋势，且pH 5.2×10.0 ng/mL HIS组显著提高（P<0.05）。结果提示，亚急性瘤胃酸中毒（SARA）发生后，pH与LPS或HIS交互作用于瘤胃上皮，降低瘤胃上皮紧密连接蛋白mRNA表达量，进而增大瘤胃上皮黏膜通透性