ELP30-tag蛋白纯化能力的原核表达研究

摘要: 目的：探究一种小分子量类弹性蛋白标签（elastin-like protein tag，ELP tag）——ELP30-tag在原核表达系统中的蛋白纯化能力。方法：人工合成ELP30-tag基因并将其构建于pET-28a(+)载体，结合2种内含肽（intein1和intein2）基因和增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein，eGFP）基因，构建4个含有不同元件序列的原核表达载体：pET-ELP30、pET-ELP30-eGFP、pET-ELP30-intein1-eGFP和pET-eGFP-intein2-ELP30；将表达载体转化大肠杆菌BL21（DE3），经IPTG诱导重组蛋白表达，并通过可逆相变循环（inverse transition cycling，ITC）纯化重组蛋白ELP30、ELP30-eGFP、ELP30-intein1-eGFP和eGFP-intein2-ELP30，随后通过调节溶液pH值或添加二硫苏糖醇（DL-Dithiothreitol，DTT）分别诱导intein1和intein2断裂，最后再经ITC分离获得纯eGFP。结果：利用设计的ELP30-tag成功纯化获得了重组蛋白ELP30、ELP30-eGFP和eGFP-intein2-ELP30；重组蛋白ELP30-intein1-eGFP和eGFP-intein2-ELP30中的内含肽可经诱导发生断裂而释放eGFP，但未能分离获得纯eGFP。本研究为小分子量ELP-tag的运用和优化设计奠定了一定基础。