改良低温螯合法分离家兔小肠绒毛和隐窝细胞及分离效果鉴定

摘要: 本试验研究家兔小肠绒毛和隐窝细胞的分离方法，为深入研究小肠上皮结构与功能提供体外模型。试验以新西兰白兔为试验材料，在不同螯合剂浓度（5、10、15、20、25 mmol/L EDTA）和螯合温度（4、25 ℃）下分离小肠绒毛和隐窝细胞，检测所分离细胞团的产量、形态、细胞活率、完整性。结果表明：1）各螯合条件下分离的绒毛和隐窝细胞形态完整，基因组DNA与总RNA完整；2）螯合温度越高且EDTA浓度越大时，细胞富集率越高，但对细胞毒害作用也越强，4 ℃、5 mmol/L EDTA条件下绒毛和隐窝细胞富集率分别为7.75%和1.01%，绒毛相对完整率和隐窝细胞相对活率分别为91.67%和93.48%；25℃、25 mmol/L EDTA条件下绒毛和隐窝细胞富集率则分别高达17.89%和4.99%，但绒毛相对完整率和隐窝细胞相对活率仅为4.25%和5.17%；3）综合分析后确定，4 ℃、10 mmol/L EDTA条件下分离效果最佳；4）在最佳条件下所分离隐窝富集物的溶菌酶和α-防御素的相对表达量极显著高于绒毛富集物（P<0.01），显示细胞纯度较高；且隐窝细胞经培养9 h后溶菌酶和α-防御素的相对表达量未发生显著变化（P>0.05），显示细胞依然具有较高活力。由此可见，改良的低温螯合法适用于家兔小肠绒毛和隐窝细胞的高效分离。