二乙烯三胺/一氧化氮聚合物诱导的奶牛乳腺上皮细胞损伤模型的建立

摘要: 泌乳期间的奶牛由于代谢旺盛，往往会产生大量一氧化氮（NO）,诱导发生氧化应激，进而对细胞产生毒害作用。本试验旨在探讨二乙烯三胺/一氧化氮聚合物（DETA/NO）诱导奶牛乳腺上皮细胞（bovine mammary epithelial cells，BMEC）氧化应激的损伤条件，并建立氧化应激模型。本试验利用不同浓度（0、10、30、100、500、1 000 μmol/L）的DETA/NO作为刺激源，作用BMEC 2、4、6、8、12、24 h，通过测定细胞存活率、抗氧化指标、炎症因子和一氧化氮（nitric oxide，NO）含量及诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）活性，筛选适宜的DETA/NO作用时间及作用浓度，建立BMEC氧化损伤模型。结果表明：1 000 μmol/L的DETA/NO作用细胞6 h，细胞存活率降低为74.27%，超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性也均显著降低（P＜0.05），然而，iNOS活性，NO、白细胞介素-1、白细胞介素-6、肿瘤坏死因子-α、丙二醛含量则呈现相反的变化规律，显著升高（P＜0.05）。综上所述，1 000 μmol/L的DETA/NO处理细胞6 h，可构建理想的BMEC氧化应激模型。