半滑舌鳎乙酰辅酶A羧化酶α基因全长cDNA分子克隆及饲料脂肪水平对其在肝脏中表达的影响

摘要: 本试验采用RT-PCR（反转录PCR）和cDNA末端快速扩增（RACE）技术从半滑舌鳎肝脏中克隆了乙酰辅酶A羧化酶α（ACC1）基因全长cDNA，并采用实时荧光定量PCR方法对半滑舌鳎ACC1基因在肠道、肝脏、肌肉、卵巢、脾脏、全脑、肾脏、心脏、肠系膜脂肪等组织中的表达进行了研究；此外，还研究了饲料脂肪水平对半滑舌鳎肝脏中ACC1基因表达的影响。结果表明：1)半滑舌鳎ACC1基因cDNA全长7 811 bp，含1个7 074 bp的开放阅读框，编码2 357个氨基酸，ACC1蛋白计算分子质量为266 ku，等电点为6.42。半滑舌鳎ACC1氨基酸序列保守位点包括1个ATP结合位点(Gly316～Gly321)、1个生物素结合位点(Val785-Met786-Lys787-Met788)、1个辅酶A结合位点(Ser1969～Val1995)。此外，半滑舌鳎ACC1基因存在可变剪接，形成另外2个同工型（isoforms），与分子质量为266 ku的ACC1相比，分别少8和15个氨基酸。半滑舌鳎ACC1氨基酸序列与其他脊椎动物的相似度很高，与斑马鱼和小鼠的相似度分别为93%和87%。2）半滑舌鳎所有组织中均检测到ACC1基因的表达，肝脏和全脑中ACC1 mRNA相对表达量显著高于其他组织（P<0.05），分别为2.67和2.53；肠道、卵巢和脂肪中次之，分别为1.14、0.97和1.10；肾脏中最低，仅为0.48。3）与对照组（未添加鱼油组）相比，3.5%鱼油组肝脏中ACC1 mRNA相对表达量显著降低（P<0.05）；7.0%和10.0%鱼油组肝脏中ACC1 mRNA相对表达量进一步降低，显著低于3.5%组和对照组（P<0.05），同时10.0%鱼油组低于7.0%鱼油组（P>0.05）。综上，本试验克隆出了半滑舌鳎ACC1基因的全长cDNA，并得出半滑舌鳎ACC1蛋白的主要功能位点为ATP结合位点、生物素结合位点、辅酶A结合位点，与其他脊椎动物相比基本保守。半滑舌鳎ACC1基因主要在肝脏和大脑等生脂组织中表达，饲料中添加鱼油显著抑制其肝脏中ACC1基因的表达，且抑制作用与鱼油添加量成正相关。