分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2019-03-05 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的：利用新型纳米森林材料，构建一种操作简单、检测快速、灵敏度高的用于现场检测的自驱动微流控芯片。方法：利用MEMS加工技术制备出具有优良光学性能和大表面积的石英纳米森林结构微流道，对该纳米森林结构的高度、宽度/横向尺寸、密度、表面积、光学性能、毛细驱动效果、荧光增敏效果做出评价,利用双抗体夹心的方法进行蓖麻毒素的检测。结果：纳米纤维锥底直径约200~300nm，高度约1.0um，纳米森林的密度约为10个/μm2，估测表面积比底面积达5:1以上。其在波长为680nm处的透光率达89.5%，驱动流速约5mm/s，与平面结构相比，其饱和荧光显色成倍提高。蓖麻毒素的检测限低于10 pg/ml，在 10~6250pg/ml范围内具有较好线性关系。结论：基于纳米森林结构，成功构建了一种具有超大表面积和高灵敏度的毛细自驱动微流控芯片。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2019-03-05 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 跨国种业企业第三次大规模的兼并重组形成了新一轮的国际种业竞争格局，而知识产权保护则是跨国种业公司兼并重组的最大动力之一。研究跨国种业公司并购形成的核心知识产权的积聚重组，更能深度考察国际种业竞争新格局的变化趋势。趋势之一，美日欧三国仍然是全球育种研发创新活动的主导者和垄断者，大规模的兼并重组，实现了技术和资源的整合，提升了国际种业集中度，全球种业42.75%的专利申请量集中在美国、日本和欧盟，并且掌握着全球64.68%的DNA重组技术专利。趋势之二，知识产权已经成为跨国种业公司保持市场竞争优势的有力武器，跨国种业公司是核心种业技术专利的拥有者，拜耳/孟山都、中国化工/先正达和杜邦先锋/陶氏的育种专利申请量占全球总育种专利申请量将近14%，全球农作物的转化体81%以上被跨国种业公司所掌握。对国际种业新格局的变化趋势进行研究分析，可以为我国种业兼并重组提供有价值的政策建议。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2019-03-05 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的：构建产fusaruside的毕赤酵母菌株，解决天然小分子免疫抑制剂fusaruside的来源问题。方法：从禾谷镰刀菌Fusarium graminearum PH-1中扩增获得合成fusaruside的相关基因—3位去饱和酶（Δ3(E)-SD）和10位去饱和酶（Δ10(E)-SD）基因；并通过2A肽策略构建两种基因的共表达载体，转化到毕赤酵母GS115中进行双酶的诱导表达；对诱导后的毕赤酵母菌体进行甲醇和二氯甲烷的处理后,经高效液相色谱质谱联用仪(HPLC-MS)检测其中产物变化。结果：3位去饱和酶和10位去饱和酶在毕赤酵母中成功共表达，SDS-PAGE显示3位去饱和酶分子量约为48 kDa，10位去饱和酶分子量约为65 kDa；HPLC-MS显示重组酵母可以产生fusaruside。结论：与fusaruside原产菌株镰刀菌相比，该酵母菌的发酵时间更短，产量更高，为fusaruside的进一步开发与应用奠定基础。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2019-03-05 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 【目的】 通过研究miR-17-5p对自噬相关基因ATG7的靶向调控机制和对细胞自噬的作用，探究miR-17-5p在结核分枝杆菌介导的自噬途径中的作用及其机制。【方法】 生物信息学分析得到miR17-5p的靶基因ATG7，通过成功构建载体ATG7野生型（pMirGLO-ATG7-3'UTR-WT）和突变型，利用双荧光素酶报告系统、Western blot验证miR-17-5p和ATG7的靶向关系，同时构建结核分枝杆菌（H37Ra）感染的人源性THP-1巨噬细胞模型，将做不同处理的细胞分为三组：miR-17-5p mimics，miR-17-5p inhibitor，miR-17-5p nc。通过实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qRT-PCR）检测H37Ra感染对miR-17-5p表达量的影响，并且进一步通过Western blot、免疫荧光观察检测LC3蛋白的表达量和自噬小体的数量。【结果】 MTB感染能够引起miR-17-5p的下调，随着感染复数的增加有明显的降低。而生物信息学预测结果显示miR-17-5p与ATG7具有靶向性，双荧光素酶报告实验、Western blot验证miR-17-5p能够和ATG7靶向结合，并对其进行负调控。进一步通过Western blot，免疫荧光观察发现miR-17-5p mimics组LC3Ⅱ的表达下调，自噬小体表达降低，而miR-17-5p inhibitor组相反。其中对H37Ra感染组与未感染组之间比较，ATG7和LC3Ⅱ蛋白表达明显增强。【结论】 miR-17-5p直接靶向结合ATG7 3'UTR抑制自噬，在巨噬细胞抗MTB过程中发挥作用。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2019-03-05 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的：建立OTUB1肝脏特异性基因敲除小鼠模型，初步分析其表型并研究OTUB1基因与肝脏代谢的关系。方法：利用Cre/Loxp系统构条件性基因敲除小鼠模型，即将OTUB1fl/fl转基因小鼠与Alb-Cre小鼠杂交,子代自交，得到OTUB1肝特异性基因敲除小鼠并进行鉴定。取同窝对照小鼠（control, NC）和肝特异型基因敲除（hepatic-specific OTUB1 knockout, HCKO）小鼠，通过PCR和免疫印迹（Western blot, WB），确证OTUB1肝脏特异性基因敲除小鼠模型是否成功构建。通过组织病理学方法，分析主要组织器官的形态以及是否存在自发的病变；通过血清生化指标检测肝脏脂代谢水平；通过血糖耐受实验（GTT）分析HCKO小鼠对血糖的控制。结果：基因组测序和WB检测结果显示HCKO小鼠肝脏中OTUB1被敲除，其他组织中OTUB1表达水平无变化，证明OTUB1肝脏特异性基因敲除小鼠模型构建成功。HCKO小鼠出生正常，各组织器官无异常，生化指标中总胆固醇水平明显降低，表明OTUB1影响肝脏脂代谢水平。糖耐受实验中HCKO小鼠血糖回落迅速，表明敲除OTUB1影响肝脏血糖调节稳态。结论：应用Cre/Loxp技术成功建立OTUB1肝脏特异性基因敲除小鼠模型,为研究OTUB1在肝脏的生理功能和调控机制提供了重要的动物模型。
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