分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2018-12-25 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 本试验旨在研究表皮生长因子（EGF）对脂多糖（LPS）刺激的应激状态下仔猪肠道钠磷转运载体蛋白Ⅱb（NaPi-Ⅱb）表达的影响。本试验由2部分组成，1）细胞试验：以猪小肠上皮细胞（IPEC-J2）为模型，试验设4个组，对照组（0 ng/mL EGF，0 μg/mL LPS）、EGF组（100 ng/mL EGF，0 μg/mL LPS）、LPS组（0 ng/mL EGF，1.0 μg/mL LPS）、EGF+LPS组（100 ng/mL EGF，1.0 μg/mL LPS），每组3个重复；2）动物试验：选取24头体重接近、健康状况良好的21日龄“长白×大白”二元杂交断奶阉公猪[平均体重(5.76±0.38 kg）]，随机分为4个组，对照组（基础饲粮）、EGF组（基础饲粮+2 mg/kg EGF）、LPS组（基础饲粮+腹腔注射100 μg/kg BW LPS）、EGF+LPS组（基础饲粮+2 mg/kg EGF+腹腔注射100 μg/kg BW LPS），每组6个重复，每个重复1头猪。结果表明：1）细胞试验中，与对照组相比，EGF组IPEC-J2细胞NaPi-Ⅱb mRNA及蛋白表达显著下降（P0.05），LPS组血清磷（P）含量显著高于对照组、EGF组、EGF+LPS组（P＜0.05），EGF组血清碱性磷酸酶（ALP）活性显著高于LPS组（P＜0.05），EGF与LPS免疫应激互作效应对血清P含量影响显著（P＜0.05），对血清Ca含量和ALP活性影响不显著（P>0.05）。与对照组相比，EGF组空肠与回肠NaPi-Ⅱb mRNA表达显著下降（P<0.05），而EGF+LPS组空肠与回肠NaPi-Ⅱb mRNA表达显著增加（P<0.05），EGF与LPS免疫应激互作效应对空肠与回肠NaPi-Ⅱb mRNA表达影响显著（P<0.05）。细胞与动物试验结果表明，EGF对NaPi-Ⅱb的表达起抑制作用，但在免疫应激状态下可促进NaPi-Ⅱb的表达，表明EGF可促进应激状态下肠道P的主动转运。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-03-13 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的 制备特异性抗人表皮生长因子受体(EGFR)的单链抗体（scFv），鉴定其生物学活性，为进一步研究基于单链抗体的免疫治疗奠定基础。方法 从分泌抗人EGFR单克隆抗体的杂交瘤细胞系提取总RNA，利用5’RACE技术扩增轻链和重链可变区（VL、VH）基因，构建具有VL、VH基因的单链抗体基因，并将构建的单链抗体基因克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1中进行表达和鉴定。ELISA鉴定单链抗体对抗原的特异性；Fortebio检测抗原抗体间的亲和力，流式细胞术检测单链抗体结合肺癌细胞系天然EGFR的功能活性。结果 获得唯一的轻重链可变区序列VL、VH，成功构建EGFR-scFv，特异性与天然EGFR蛋白结合，亲和力达3.22×10-9mol/L。结论 成功构建了抗人EGFR单链抗体，为肺癌免疫导向治疗研究奠定了基础。
分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2017-10-10 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 本文旨在讨论表皮生长因子（EGF）对葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的结肠炎模型小鼠肠道损伤的修复作用。选用24只6周龄BALB/c小鼠，随机分为3组，即:正常对照组、DSS模型对照组、DSS+EGF组。正常对照组小鼠饮用自来水；DSS模型对照组小鼠在试验第1～7天饮用5%DSS水溶液，第8～10天饮用自来水；DSS+EGF组小鼠按照DSS模型对照组处理，同时每天皮下注射EGF 2次，共注射10 d。结果表明：1）与正常对照组相比，DSS模型对照组小鼠结肠长度极显著降低（P<0.01）；与DSS模型对照组相比，DSS+EGF组小鼠结肠长度极显著增加（P<0.01）。2）DSS模型对照组小鼠结肠可见典型溃疡，结肠损伤程度评分（CDS）极显著高于正常对照组（P<0.01）；DSS+EGF组小鼠结肠组织未见溃疡，与DSS模型对照组相比，CDS极显著降低（P<0.01）。3）与正常对照组相比，DSS模型对照组小鼠结肠紧密连接蛋白（Occludin）浓度显著降低（P<0.05）；与DSS模型对照组相比，DSS+EGF组小鼠结肠Occludin浓度显著升高(P＞0.05)。4）与正常对照组相比，DSS模型对照组小鼠结肠白细胞介素-2（IL-2）和白细胞介素-4（IL-4）浓度极显著降低（P<0.01），白细胞介素-10（IL-10）浓度显著降低（P＜0.05）；与DSS模型对照组相比，DSS+EGF组结肠IL-2和IL-4浓度极显著增加（P<0.01），IL-10浓度显著增加（P<0.05）。由此可见，EGF可能通过提高肠道Occludin表达水平，调节肠道细胞因子浓度趋于正常水平，从而修复受损肠道组织，维持肠道黏膜屏障的完整性。
分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2017-10-10 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 本研究旨在探讨表皮生长因子（EGF）调控猪小肠上皮细胞IPEC-J2中钠依赖IIb型磷转运蛋白（NaPi-IIb）表达的分子机制。试验分别用EGF受体酪氨酸激酶抑制剂（tyrphostin AG 1478）、蛋白激酶A（PKA）抑制剂（H89）、蛋白激酶C（PKC）抑制剂（k4393）、p38抑制剂（SB 203580）、细胞外信号调节激酶（ERK）抑制剂（PD98059）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）抑制剂（anisomycin）与EGF共同处理IPEC-J2细胞，利用Western blot检测相关通路蛋白及目的蛋白（NaPi-IIb）的表达水平。结果显示，相较于对照组，EGF处理后NaPi-IIb表达水平显著降低（P<0.05）；相较于无抑制剂组，EGF受体、PKA、PKC、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）/p38、MAPK/ERK1/2、MAPK/JNK的特异性抑制剂处理IPEC-J2后，NaPi-IIb表达水平显著提高（P<0.05），其中添加MAPK/ERK1/2特异性抑制剂显著降低了MAPK/ERK1/2在Tyr204位点的磷酸化水平（P<0.05），添加MAPK/JNK的特异性抑制剂显著降低了MAPK/JNK1/2/3在Thr183和Tyr185位点的磷酸化水平（P<0.05），说明该2组抑制剂对该通路的抑制作用是通过降低上述位点的磷酸化水平实现的。本研究结果表明EGF受体、PKA、PKC、p38、ERK和JNK均介导了EGF调控IPEC-J2细胞中NaPi-IIb的表达。
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