分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2018-12-25 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 本试验以猪小肠上皮细胞（intestinal porcine epithelial cells-1，IPEC-1）为模型，探讨牛膝多糖（Achyranthes bidentata polysaccharides，ABPS）对IPEC-1增殖、紧密连接相关蛋白mRNA表达和沙门氏菌侵染的影响。在IPEC-1细胞培养基中分别加入相应剂量的ABPS，使培养基中ABPS终浓度分别为0、50、100、200、400 μg/mL。分别采用MTT法、实时荧光定量PCR法和平板细菌计数法检测ABPS对IPEC-1的影响。结果表明：1）与对照组相比，ABPS对IEPC-1增殖无显著影响（P>0.05）。2）ABPS处理能显著抑制沙门氏菌的侵染，随着ABPS浓度的增加，其抑制效果先增加后减少，浓度为50 μg/mL时抑制效果达到峰值，其细胞被侵染的沙门氏菌数量极显著低于对照组、200、400 μg/mL ABPS组（P<0.01）。3）与对照组相比，50、200 μg/mL ABPS均极显著上调IEPC-1紧密连接相关蛋白[Ras相关的C3肉毒素底物1（RAC1）、细胞质密闭小带-1（ZO-1）、Occludin、Claudin-1]mRNA的相对表达（P<0.01）。由此可知，适量的ABPS能够通过上调IEPC-1紧密连接相关蛋白mRNA表达，从而增强小肠黏膜的屏障功能，抑制沙门氏菌的侵染。
分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2018-12-25 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 本试验旨在研究表皮生长因子（EGF）对脂多糖（LPS）刺激的应激状态下仔猪肠道钠磷转运载体蛋白Ⅱb（NaPi-Ⅱb）表达的影响。本试验由2部分组成，1）细胞试验：以猪小肠上皮细胞（IPEC-J2）为模型，试验设4个组，对照组（0 ng/mL EGF，0 μg/mL LPS）、EGF组（100 ng/mL EGF，0 μg/mL LPS）、LPS组（0 ng/mL EGF，1.0 μg/mL LPS）、EGF+LPS组（100 ng/mL EGF，1.0 μg/mL LPS），每组3个重复；2）动物试验：选取24头体重接近、健康状况良好的21日龄“长白×大白”二元杂交断奶阉公猪[平均体重(5.76±0.38 kg）]，随机分为4个组，对照组（基础饲粮）、EGF组（基础饲粮+2 mg/kg EGF）、LPS组（基础饲粮+腹腔注射100 μg/kg BW LPS）、EGF+LPS组（基础饲粮+2 mg/kg EGF+腹腔注射100 μg/kg BW LPS），每组6个重复，每个重复1头猪。结果表明：1）细胞试验中，与对照组相比，EGF组IPEC-J2细胞NaPi-Ⅱb mRNA及蛋白表达显著下降（P0.05），LPS组血清磷（P）含量显著高于对照组、EGF组、EGF+LPS组（P＜0.05），EGF组血清碱性磷酸酶（ALP）活性显著高于LPS组（P＜0.05），EGF与LPS免疫应激互作效应对血清P含量影响显著（P＜0.05），对血清Ca含量和ALP活性影响不显著（P>0.05）。与对照组相比，EGF组空肠与回肠NaPi-Ⅱb mRNA表达显著下降（P<0.05），而EGF+LPS组空肠与回肠NaPi-Ⅱb mRNA表达显著增加（P<0.05），EGF与LPS免疫应激互作效应对空肠与回肠NaPi-Ⅱb mRNA表达影响显著（P<0.05）。细胞与动物试验结果表明，EGF对NaPi-Ⅱb的表达起抑制作用，但在免疫应激状态下可促进NaPi-Ⅱb的表达，表明EGF可促进应激状态下肠道P的主动转运。
分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2017-10-10 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 为了研究应激和氨基酸对上皮抗菌肽表达的作用和分子机制，试验选用猪小肠上皮细胞系IPEC-J2作为研究对象，饥饿和大肠杆菌感染分别作为营养应激和细菌应激，丙氨酸和异亮氨酸作为氨基酸处理，收集细胞mRNA，利用荧光定量PCR测定β防御素和相关信号通路蛋白表达水平。结果表明：与对照组（DMEM/F12培养基）相比，饥饿显著降低了小肠上皮细胞猪防御素2（pBD-2）、猪防御素3（pBD-3）和猪防御素EP2c（pEP2c）及沉默信息调节因子2同源蛋白1(Sirt1)、叉头转录因子1（FoxO1）和叉头转录因子4(FoxO4)的表达（P0.05）。与对照组（饥饿培养基）相比，丙氨酸处理未显著影响pBD-2和pBD-3的表达（P>0.05），但显著提高了pEP2c表达水平（P<0.05）；异亮氨酸处理使pBD-2、pBD-3和pEP2c表达水平显著升高（P<0.05）。与对照组相比，丙氨酸和异亮氨酸处理不同程度影响信号通路蛋白转录，丙氨酸处理显著提高了Sirt1和FoxO4的表达水平（P<0.05），异亮氨酸处理显著促进了Sirt1、FoxO1和FoxO4的表达（P<0.05）。由此得出，营养应激降低猪小肠上皮细胞中β防御素的表达，而氨基酸的补充可促进其表达，该调控作用可能与Sirt1和叉头转录因子（FoxO）信号通路蛋白有关。
分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2017-10-10 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 本研究旨在探讨表皮生长因子（EGF）调控猪小肠上皮细胞IPEC-J2中钠依赖IIb型磷转运蛋白（NaPi-IIb）表达的分子机制。试验分别用EGF受体酪氨酸激酶抑制剂（tyrphostin AG 1478）、蛋白激酶A（PKA）抑制剂（H89）、蛋白激酶C（PKC）抑制剂（k4393）、p38抑制剂（SB 203580）、细胞外信号调节激酶（ERK）抑制剂（PD98059）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）抑制剂（anisomycin）与EGF共同处理IPEC-J2细胞，利用Western blot检测相关通路蛋白及目的蛋白（NaPi-IIb）的表达水平。结果显示，相较于对照组，EGF处理后NaPi-IIb表达水平显著降低（P<0.05）；相较于无抑制剂组，EGF受体、PKA、PKC、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）/p38、MAPK/ERK1/2、MAPK/JNK的特异性抑制剂处理IPEC-J2后，NaPi-IIb表达水平显著提高（P<0.05），其中添加MAPK/ERK1/2特异性抑制剂显著降低了MAPK/ERK1/2在Tyr204位点的磷酸化水平（P<0.05），添加MAPK/JNK的特异性抑制剂显著降低了MAPK/JNK1/2/3在Thr183和Tyr185位点的磷酸化水平（P<0.05），说明该2组抑制剂对该通路的抑制作用是通过降低上述位点的磷酸化水平实现的。本研究结果表明EGF受体、PKA、PKC、p38、ERK和JNK均介导了EGF调控IPEC-J2细胞中NaPi-IIb的表达。
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