分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2018-12-24 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 本试验旨在研究酵母浸粉对家蚕血淋巴中甘油三酯含量和尿酸代谢的影响。以蚕品种“菁松×皓月”为试验材料，挑选大小一致、发育整齐的家蚕600头，随机分成4个组（每组3个重复，每个重复50头，雌雄各占1/2），从5龄起蚕开始，3个试验组（JM1组、JM2组、JM3组）分别饲喂以1%、2%和4%酵母浸粉溶液涂抹的新鲜桑叶，对照组则以蒸馏水替代酵母浸粉溶液，分别在添食酵母浸粉3、4、5 d后检测家蚕血淋巴中尿酸含量、甘油三酯含量以及黄嘌呤氧化酶（XOD）活性。结果表明：添食不同浓度酵母浸粉5 d后家蚕体重增长率均较对照组显著升高（P0.05），且随着酵母浸粉浓度的升高，体重增长率呈现下降的趋势。添食不同浓度酵母浸粉5 d后家蚕血淋巴中甘油三酯含量比对照组增加42%～98%，其中JM1组、JM2组与对照组的差异达到显著水平（P0.05）。3个试验组家蚕血淋巴中XOD活性在各时间点均显著高于对照组（P<0.05），但第3、4天家蚕血淋巴中XOD活性随着酵母浸粉浓度的升高均呈现先上升后下降趋势。家蚕血淋巴中尿酸含量与XOD活性之间存在显著或极显著的正相关性（P<0.05或P<0.01），相关系数在0.652～0.902。由此得出，添食一定浓度的酵母浸粉可导致家蚕血淋巴中尿酸含量、甘油三酯含量以及XOD活性升高，从而影响家蚕的尿酸代谢。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-11-21 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 中肠是家蚕的消化器官，也是抵御外界病源入侵的生理屏障。为克隆和鉴定新的家蚕中肠特异启动子，首先利用RT-PCR检测家蚕组织特异表达候选基因BmP56的表达特性，发现其只在中肠组织表达。进一步克隆该基因上游调控序列P56，构建由该序列驱动红色荧光蛋白基因DsRed表达的转基因载体pBac[P56DsRedSV40，3×P3EGFP]，经显微注射和荧光筛选获得转基因家蚕。表达分析显示，报告基因DsRed只在转基因家蚕中肠组织表达，与BmP56的表达特征一致，说明克隆的上游调控序列P56是有活性的家蚕中肠特异启动子。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-11-21 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 中肠是家蚕的消化器官，也是抵御外界病源入侵的生理屏障。为克隆和鉴定新的家蚕中肠特异启动子，首先利用RT-PCR检测家蚕组织特异表达候选基因BmP56的表达特性，发现其只在中肠组织表达。进一步克隆该基因上游调控序列P56，构建由该序列驱动红色荧光蛋白基因DsRed表达的转基因载体pBac[P56DsRedSV40，3×P3EGFP]，经显微注射和荧光筛选获得转基因家蚕。表达分析显示，报告基因DsRed只在转基因家蚕中肠组织表达，与BmP56的表达特征一致，说明克隆的上游调控序列P56是有活性的家蚕中肠特异启动子。
分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2017-10-23 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 本试验旨在研究热激条件下家蚕血液磷酸化蛋白的表达变化，为深入研究其功能提供参考。试验设对照组和热激组，每组选取五龄第3天家蚕幼虫各30头（雌雄各占1/2），在40 ℃条件下分别热激处理0、10 min，然后利用双向电泳、Pro-Q Diamond染色、质谱技术对表达差异的磷酸化蛋白进行研究。结果表明：1）银染图谱30 ku区积累了大量蛋白，经Pro-Q Diamond染色后发现它们属于磷酸化蛋白。2）经过多次取样和质谱鉴定，最终获得了3个30K蛋白，分别是PBMHPC-6、PBMHPC-19和PBMHPC-12。3）热激处理10 min后，3个30K蛋白的表达量与热激处理0 min相比显著上调(P<0.05)。由此得出，五龄家蚕血液富含30K蛋白，它们不仅在脂质运输方面承担着重要的角色，而且很可能参与热激应答。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-07-24 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 摘要 目的：克隆获得家蚕（Bombyx mori）Bmtol基因序列，并对其蛋白结构进行预测，分析其在组织和JHA处理后头部的表达差异，为该基因的功能研究提供参考。方法：以家蚕的全组织cDNA为模板利用RT-PCR技术扩增和克隆获得Bmtol基因cDNA全长序列，并提交至GenBank数据库；利用多种生物信息学软件预测分析其编码蛋白的理化特性和结构特征；采用MREGA5.0软件中的邻接法（neighbor-joining，NJ）构建BmTOL及其它昆虫同源TO的进化树；通过qPCR技术分析Bmtol基因在5龄3天家蚕不同组织的表达情况，及JHA处理5龄蚕后在0 h、24 h、48 h、72 h和96 h家蚕头部的表达情况。结果：克隆获得了家蚕Bmtol基因的cDNA序列（GenBank审查中），Bmtol基因的开放阅读框（ORF）长度为759 bp，编码252个氨基酸，预测其蛋白分子量为27.72 KD，理论等电点为6.16，有信号肽，无跨膜结构，且第25—251位氨基酸之间存在一个保幼激素结合蛋白家族JHBP保守结构域；N端为疏水区域，可能与保幼激素结合蛋白的核心部位有关。亚细胞定位分析表明，BmTOL属于分泌型蛋白，主要集中在内质网-高尔基体-质膜分泌途径上。BmTOL蛋白具有3个α螺旋，第34位的Cys和第44位Cys形成一个二硫键链接在α1螺旋和N末端，构成BmTOL蛋白与配体结合的核心部位。序列比对结果显示，家蚕BmTOL序列与其他昆虫TO的氨基酸序列一致性差别较大。家蚕BmTOL与果蝇DmTO的相似性为25.10%，与烟草烟草天蛾的相似性为19.69%，与冈比亚按蚊的相似性为25.78%，与埃及伊蚊的相似性为23.53%，与黑花蝇的相似性为28.17%，与意大利蜜蜂的相似性为23.05%，与苹浅褐卷蛾的相似性为21.18%。系统进化树分析表明，所有选用昆虫TO形成两个大的分支：苹浅褐卷蛾EpTO1、烟草天蛾MsTO、意大利蜜蜂AmTOL、果蝇DmTO和黑花蝇PrTOL聚为一个分支，埃及伊蚊AaTO、冈比亚按蚊AgTOL-2和家蚕BmTOL聚为另一大分支。qPCR结果显示，Bmtol基因在家蚕头部、表皮和精巢有较高表达，其他组织表达量很低或没有。在JHA处理的5龄家蚕的头部，Bmtol基因在处理后0 h、24 h、48 h、72 h和96 h的表达量差异不明显。结论：BmTOL蛋白属于JHBP家族，具有JHBP家族的典型结构；组织表达谱和JHA处理结果暗示，BmTOL属保幼激素结合蛋白（JHBP），在家蚕中除保幼激素结合之外还参与其他多种生理功能。
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