分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2018-12-24 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 本试验旨在研究饲粮中添加牛至油对断奶仔猪生长性能、血清激素指标及小肠组织胰岛素样生长因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）含量的影响。选取体重相近的25日龄断奶“大白×长白”二元杂交仔猪120头，随机分为4组，每组3个重复，每个重复10头猪。对照组饲喂基础饲粮，3个试验组分别在基础饲粮中添加300、500、800 mg/kg牛至油。预试期为5 d，正试期为30 d。结果表明，与对照组相比，3个试验组断奶仔猪第1~30天的平均日采食量均极显著提高（P<0.01），平均日增重显著或极显著提高（P<0.05或P<0.01），腹泻率极显著降低（P<0.01）；3个试验组断奶仔猪第15天的血清IGF-Ⅰ含量显著提高（P<0.05），第30天的血清IGF-Ⅰ含量极显著提高（P<0.01）；3个试验组断奶仔猪十二指肠和回肠IGF-Ⅰ含量极显著提高（P<0.01）。由此可见，饲粮中添加牛至油可以提高断奶仔猪血清和小肠组织IGF-Ⅰ含量，促进断奶仔猪生长。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-11-21 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 金黄色葡萄球菌是一类重要的病原菌，其毒力因子的表达及分泌过程由多种双组份信号转导系统（two component signal transduction system, TCSTS）共同调控，其中ArlRS双组份信号转导系统与细菌的生长和分裂密切相关。ArlRS双组份系统的信号传递通过组氨酸激酶ArlS磷酸化实现,ArlS的胞内域被认为是调控毒力因子表达的重要功能域, 本文以ArlS蛋白的胞内域部分即ArlSCA为目标蛋白进行相关的活性研究。首先构建pProEX-HTa-arls和pProEX-HTa-arlr重组质粒，对目的蛋白进行诱导表达。其次，利用金属离子螯合层析、离子交换层析以及凝胶过滤层析方法对目的蛋白进行分离纯化，纯化后的ArlR蛋白纯度可达98%，产量约为25 mg/L；纯化后的ArlS蛋白纯度可达90%，产量约为15 mg/L。圆二色谱检测结果显示纯化后的目的蛋白有完整的二级结构具有激酶活性。体外磷酸化结果显示，ArlS蛋白自磷酸化后可以将磷酸基团转移给反应调控蛋白ArlR。最后，利用定点突变的方法，构建了418位和420位氨基酸残基突变的表达载体pProEX-HTa-ArlSCAG418A和pProEX-HTa-ArlSCAG420A。ArlSCAG418A和ArlSCAG420A蛋白不具有激酶活性，说明418位和420位氨基酸残基在ArlS蛋白的自磷酸过程中起着关键作用。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-11-21 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 金黄色葡萄球菌是一类重要的病原菌，其毒力因子的表达及分泌过程由多种双组份信号转导系统（two component signal transduction system, TCSTS）共同调控，其中ArlRS双组份信号转导系统与细菌的生长和分裂密切相关。ArlRS双组份系统的信号传递通过组氨酸激酶ArlS磷酸化实现,ArlS的胞内域被认为是调控毒力因子表达的重要功能域, 本文以ArlS蛋白的胞内域部分即ArlSCA为目标蛋白进行相关的活性研究。首先构建pProEX-HTa-arls和pProEX-HTa-arlr重组质粒，对目的蛋白进行诱导表达。其次，利用金属离子螯合层析、离子交换层析以及凝胶过滤层析方法对目的蛋白进行分离纯化，纯化后的ArlR蛋白纯度可达98%，产量约为25 mg/L；纯化后的ArlS蛋白纯度可达90%，产量约为15 mg/L。圆二色谱检测结果显示纯化后的目的蛋白有完整的二级结构具有激酶活性。体外磷酸化结果显示，ArlS蛋白自磷酸化后可以将磷酸基团转移给反应调控蛋白ArlR。最后，利用定点突变的方法，构建了418位和420位氨基酸残基突变的表达载体pProEX-HTa-ArlSCAG418A和pProEX-HTa-ArlSCAG420A。ArlSCAG418A和ArlSCAG420A蛋白不具有激酶活性，说明418位和420位氨基酸残基在ArlS蛋白的自磷酸过程中起着关键作用。
分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2017-10-10 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 本文旨在研究在基础饲粮中添加过瘤胃蛋氨酸（RPMet）、过瘤胃赖氨酸（RPLys）对荷斯坦奶公牛生长性能和胴体化学成分的影响，探讨用RPMet和RPLys替代部分饲粮粗蛋白质的可行性。试验采用完全随机设计，选择12月龄左右，体重、体尺相近的健康奶公牛25头，随机分为5组，每组5头。对照组饲喂基础饲粮，4个试验组M15、L30、M15+L30、LCP组分别在基础饲粮中添加RPMet 15 g/d、RPLys 30 g/d、RPMet 15 g+RPLys 30 g/d、RPMet 15 g+RPLys 30 g/d（同时降低饲粮粗蛋白质2.20%）。预试期10 d，正试期150 d。结果表明，与对照组相比：1）基础饲粮中添加RPMet和RPLys对奶公牛干物质采食量无显著影响（P＞0.05）；L30、M15+L30、LCP组末重和平均日增重显著增加（P＜0.05），且均以M15+L30组最高，但M15+L30组与LCP组无显著差异（P＞0.05）；M15+L30和LCP组料重比显著降低（P＜0.05），以M15+L30组最低，这2组间差异不显著（P＞0.05）。2）M15+L30和LCP组奶公牛胸围和胴体中粗蛋白质含量显著提高（P＜0.05），这2组间差异不显著（P＞0.05）。3）M15+L30和LCP组奶公牛胴体中必需氨基酸苏氨酸、亮氨酸、精氨酸的含量显著提高（P＜0.05），这2组间差异不显著（P＞0.05），M15+L30组异亮氨酸含量显著提高（P＜0.05）；M15+L30和LCP组奶公牛胴体中非必需氨基酸中天冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、脯氨酸以及总氨基酸含量显著提高（P＜0.05），L30和M15+L30组酪氨酸含量显著提高（P＜0.05），这2组间均无显著差异（P＞0.05）。由此可见，饲粮中添加RPMet和RPLys在一定程度上提高了奶公牛的生长性能，增加胴体中蛋白质的合成和氨基酸沉积，且添加RPMet 15 g+RPLys 30 g/d能够在一定程度上替代部分饲粮粗蛋白质（2.20%）。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-07-24 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 金黄色葡萄球菌是一类重要的病原菌，其毒力因子的表达及分泌过程由多种双组份信号转导系统（two component signal transduction system, TCSTS）共同调控，其中ArlRS双组份信号转导系统与细菌的生长和分裂密切相关。ArlRS双组份系统的信号传递通过组氨酸激酶ArlS磷酸化实现,ArlS的胞内域被认为是调控毒力因子表达的重要功能域, 本文以ArlS蛋白的胞内域部分即ArlSCA为目标蛋白进行相关的活性研究。首先构建pProEX-HTa-arls和pProEX-HTa-arlr重组质粒，对目的蛋白进行诱导表达。其次，利用金属离子螯合层析、离子交换层析以及凝胶过滤层析方法对目的蛋白进行分离纯化，纯化后的ArlR蛋白纯度可达98%，产量约为25 mg/L；纯化后的ArlS蛋白纯度可达90%，产量约为15 mg/L。圆二色谱检测结果显示纯化后的目的蛋白有完整的二级结构具有激酶活性。体外磷酸化结果显示，ArlS蛋白自磷酸化后可以将磷酸基团转移给反应调控蛋白ArlR。最后，利用定点突变的方法，构建了418位和420位氨基酸残基突变的表达载体pProEX-HTa-ArlSCAG418A和pProEX-HTa-ArlSCAG420A。ArlSCAG418A和ArlSCAG420A蛋白不具有激酶活性，说明418位和420位氨基酸残基在ArlS蛋白的自磷酸过程中起着关键作用。
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