重组猪胰蛋白酶及其R122位点突变体在毕赤酵母中的高效表达及其性质研究

分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-03-15 合作期刊: 《中国生物工程杂志》

张潘潘 许延吉 王之可 刘晓 李素霞

摘要： 目的：研究R122位点突变重组猪胰蛋白酶，与野生型酶相比较，该位点对重组猪胰蛋白酶（RPT）性质的影响。方法：以毕赤酵母GS115作为表达宿主，对RPT、突变体mRPT(R122H)和 mRPT(R122H/R73G/R130T)进行表达及纯化。并对其性质和稳定进行对比研究。结果：重组胰蛋白酶及其突变体在毕赤酵母中均获得了高效表达。相对于RPT，突变体mRPT(R122H)和 mRPT(R122H/R73G/R130T)在以N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯 （BAEE）为底物时，具有更强底物结合力，三者的米氏常数分别为18.8μM， 8.5 μM和11.0 μM；两突变体耐高温耐碱能力增强；在Ca2+存在及去除的条件下，突变体具有更强的抗自降解能力。结论：可以利用毕赤酵母高效表达重组胰蛋白酶及其突变体。mRPT(R122H)和mRPT(R122H/R73G/R130T) 相对于野生型RPT，对高pH条件和高温的耐受性增强，该稳定性的提高主要归因于R122位点的突变。

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