DLX1对BMP9诱导的间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化的影响

分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-07-24 合作期刊: 《中国生物工程杂志》

徐丽 吉彩霞 刘晓骅 喻婷婷 罗进勇

摘要： 、摘要 目的：分析和确认转录因子DLX1在骨形态发生蛋白9（Bone Morphogenetic Protein 9, BMP9）诱导的间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化中的作用。方法： 首先，BMP9腺病毒感染C3H10T1/2细胞，RT-PCR和Western Blot检测下DLX1表达变化；随后，利用重组腺病毒技术分别过表达DLX1和RNA干扰（RNA Intenference, RNAi）抑制DLX1的表达，并利用碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase, ALP)染色、钙盐沉积实验（茜素红染色），免疫细胞化学检测骨钙素（Osteocalcin, OCN）表达和裸鼠皮下异位成骨实验分析DLX1对于BMP9诱导的C3H10T1/2细胞成骨分化的影响。荧光素酶报告基因实验和Western Blot分析DLX1对于BMP9诱导的C3H10T1/2细胞Smad1/5/8信号途径的影响。结果：BMP9可以促进C3H10T1/2细胞中DLX1基因和蛋白表达水平；过表达DLX1在体外可进一步促进BMP9诱导的C3H10T1/2细胞的ALP活性、钙盐沉积以及OCN的表达，过表达DLX1亦可促进BMP9诱导的裸鼠皮下异位成骨；反之，RNAi抑制DLX1表达后，由BMP9诱导的C3H10T1/2细胞的ALP活性、钙盐沉积、OCN表达和裸鼠皮下异位成骨均相应均受到抑制。过表达DLX1可进一步增强BMP9诱导的C3H10T1/2细胞中Smad/1/5/8的转录调控活性，RNAi降低DLX1表达则可抑制BMP9诱导Smad/1/5/8的转录调控活性。但是，无论过表达DLX1和RNAi降低DLX1表达均不会对BMP9诱导的Smad/1/5/8磷酸化造成影响。结论：DLX1可以调节BMP9诱导的间充质干细胞C3H10T1/2细胞成骨分化，其调节作用可能是通过影响Smad1/5/8信号的转录调控活性而实现的。

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