分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-11-21 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 聚羟基脂肪酸酯作为性质优良的生物塑料，引起了广泛的关注。由于聚羟基脂肪酸合成酶PhaC特异性较强，难以通过生物合成方法获得含乳酸单体聚合物。为了实现乳酸的聚合，PhaC的筛选至关重要。以甘油为底物，通过引入Klebsiella pneumoniae的甘油脱水酶DhaB123及其激活因子GdrAB以及Salmonella typhimurium LT2的丙醛脱氢酶基因PduP，获得3-羟基丙酰辅酶A；通过引入Megasphaera elsdenii DSM 20460的丙酰辅酶A转移酶PCT，获得乳酰辅酶A；并对3种不同聚羟基脂肪酸合成酶的作用进行考察。在Pseudomonas putida的原始酶PhaC1或者PhaC2的作用下，不能实现乳酸的聚合；而在双位点突变（Ser325Thr和Gln481Lys）的PhaC1（STQK）存在条件下，重组菌可以利用甘油合成聚3-羟基丙酸-co-乳酸。经过对溶氧、有机氮源等发酵条件的优化，聚3-羟基丙酸-co-乳酸的产量可以达到0.22g/L，占细胞干重的3.2%，是含乳酸单体聚合物生物合成研究的一次有益尝试。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-11-21 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 聚羟基脂肪酸酯作为性质优良的生物塑料，引起了广泛的关注。由于聚羟基脂肪酸合成酶PhaC特异性较强，难以通过生物合成方法获得含乳酸单体聚合物。为了实现乳酸的聚合，PhaC的筛选至关重要。以甘油为底物，通过引入Klebsiella pneumoniae的甘油脱水酶DhaB123及其激活因子GdrAB以及Salmonella typhimurium LT2的丙醛脱氢酶基因PduP，获得3-羟基丙酰辅酶A；通过引入Megasphaera elsdenii DSM 20460的丙酰辅酶A转移酶PCT，获得乳酰辅酶A；并对3种不同聚羟基脂肪酸合成酶的作用进行考察。在Pseudomonas putida的原始酶PhaC1或者PhaC2的作用下，不能实现乳酸的聚合；而在双位点突变（Ser325Thr和Gln481Lys）的PhaC1（STQK）存在条件下，重组菌可以利用甘油合成聚3-羟基丙酸-co-乳酸。经过对溶氧、有机氮源等发酵条件的优化，聚3-羟基丙酸-co-乳酸的产量可以达到0.22g/L，占细胞干重的3.2%，是含乳酸单体聚合物生物合成研究的一次有益尝试。
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