分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2018-12-20 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 本试验旨在研究苜蓿素对脂多糖（LPS）刺激下体外培养奶牛乳腺上皮细胞活性和炎症相关基因表达的影响。将体外培养的奶牛乳腺上皮细胞分成6组，对照组采用基础培养基，试验组在基础培养基中分别加入1 μg/mL LPS（L组）、1 μg/mL LPS和2.5 μg/mL苜蓿素（L+2.5组）、1 μg/mL LPS和5.0 μg/mL苜蓿素（L+5组）、1 μg/mL LPS和10.0 μg/mL苜蓿素（L+10组）以及1 μg/mL LPS和15.0 μg/mL苜蓿素（L+15组），培养24 h。结果表明：1）与对照组相比，L组奶牛乳腺上皮细胞相对增殖率极显著降低（P<0.01），而L+2.5组和L+10组则极显著升高（P<0.01）；2）与L组相比，L+10组和L+15组细胞超氧化物歧化酶活性显著升高（P<0.05），而乳酸脱氢酶活性和一氧化氮浓度显著降低（P<0.05）；3）与L组相比，L+5组和L+10组细胞的白细胞介素8、白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α、Toll样受体2和Toll样受体4的相对表达量均极显著降低（P<0.01），L+5组细胞的髓样分化因子88相对表达量均显著降低（P<0.05）。结果提示，在LPS刺激下，添加苜蓿素能够提高奶牛乳腺上皮细胞活性和抗氧化性能，抑制炎症相关基因的表达，发挥抗炎作用。
分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2017-10-10 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 通过粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素-4(IL-4)体外诱导外周血单核细胞为树突状细胞，为利用树突状细胞免疫疗法治疗奶牛乳房炎奠定基础和提供细胞模型。利用淋巴细胞分离液分离获得奶牛外周血单核细胞，在6孔板内培养2 h后，弃掉含有大量的T细胞和B细胞上清液，贴壁的基本上是单核细胞，磷酸盐缓冲液清洗5次，加入含有GM-CSF和IL-4的2 mL培养基进行3 d诱导。之后，从培养基顶部小心吸弃1.4 mL的培养基，然后再补加含有GM-CSF和IL-4的1.8 mL培养基继续诱导3 d。每天通过显微镜观察细胞形态。第7天经流式检测细胞表面抗原CD11c、CD14、主要组织相容性复合体Ⅱ（MHCⅡ）、CD40、CD80、CD86的表达。结果表明：1)第2天，一些细胞表面可以生长出刺突并伴随着伪足的生长。第3天，细胞表面的刺突和伪足越来越多。第4、5天，一些带有刺突和伪足的细胞开始聚集和融合。第6天，单核细胞基本被诱导为树突状细胞，细胞表面含有大量清晰可见的刺突和伪足。2)经流式检测，CD14、CD11c、MHCⅡ阳性表达细胞分别占诱导细胞的6.8%、65.0%、75.9%，CD80和CD86阳性表达细胞分别占诱导细胞的2.0%和1.2%。综上所述，采用奶牛外周血单核细胞经体外诱导能够获得一定纯度的奶牛树突状细胞。
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