分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2018-12-24 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 本试验旨在研究断奶日龄对湖羊羔羊瘤胃微生物多样性的影响。选择66只湖羊公羔，在羔羊1、14、28日龄各屠宰6只羔羊，剩余48只羔羊随机分为2组，分别于28和56日龄断奶，在42、56、70和84日龄每组屠宰6只羔羊，取瘤胃内容物样品。所有羔羊7 日龄开始饲喂开食料。试验期为羔羊1~84日龄。结果表明：断奶日龄对白色瘤胃球菌（Ruminococcus albus）、黄色瘤胃球菌（Ruminococcus flavefaciens）、牛链球菌（Streptococcus bovis）、产琥珀酸丝状杆菌（Fibrobacter succinogenes）和布氏密螺旋体（Treponema bryantii）的相对丰度无显著影响（P>0.05）。随着日龄增加，羔羊瘤胃微生物多样性不断增加，28日龄断奶的羔羊相对56日龄断奶的羔羊其瘤胃微生物多样性提高。结果提示，瘤胃微生物多样性受日龄和断奶日龄的影响，早期断奶可加速瘤胃微生物区系的建立。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-06-27 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 利用甘油醛三磷酸脱氢酶（glyceraldehydes-3-phosphatedehydrogenase，GAP）启动子在毕赤酵母中表达人鹅型溶菌酶2（human goose-type lysozyme 2，hLysG2），并在小试规模建立一套有效的重组hLysG2（recombinant hLysG2，rhLysG2）生产工艺流程。根据毕赤酵母密码子偏爱性设计并人工合成hLysG2基因，将其连接至pGAPZA 质粒中，构建重组表达质粒pGAPZA-hLysG2。将重组表达载体线性化后电转化毕赤酵母GS115感受态细胞，通过Zeocin抗性筛选获取高拷贝重组菌株，并在5L生物反应器中进行发酵培养。发酵60 h后发酵液上清酶活性达到最高， 发酵液上清经SDS-PAGE及Western blot检测证实rhLysG2得到表达。与诱导型表达相比，组成型表达发酵时间缩短了48 h，上清中rhLysG2总活性提高了23.8%；使用甲壳素亲和层析和分子筛层析对rhLysG2进行纯化后，每升发酵液上清可纯化到187.4 mg重组蛋白，纯化产物纯度达99.0%以上；浊度测定法分析显示，在pH 5.6、30℃和0.1 mol/L Na+的条件下，rhLysG2可达到最大酶活性13500 U/mg。利用GAP启动子在毕赤酵母中成功表达了高纯度和高活性的rhLysG2，避免了甲醇的使用，缩短了发酵时间，提高了蛋白产量，为将rhLysG2开发为新型抗耐药菌药物奠定了基础。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-01-12 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 对人源类溶菌酶蛋白6（human lysozyme-like protein 6，LYZL6）在受精过程中的作用进行研究，并对重组LYZL6蛋白（recombinant LYZL6，rLYZL6）的生理特性进行分析，从而揭示其生理功能。细胞免疫荧光法确定LYZL6定位于成熟精子头部的顶体后区域，反转录PCR（RT-PCR）分析表明精子表面的LYZL6蛋白来源于睾丸和附睾的分泌，Western blot法分析表明精子获能前后表面LYZL6的量无明显改变。半透明带结合实验和精子穿透实验分析表明兔抗LYZL6血清未明显抑制人精子结合透明带，但可明显抑制精卵融合。利用毕赤酵母表达系统成功表达了rLYZL6，使用甲壳素亲和层析和凝胶过滤层析可从发酵上清中纯化到具有生物活性的rLYZL6。酶联免疫吸附法（ELISA）分析显示rLYZL6不具有透明质酸结合能力、透明质酸水解能力和自由基清除活性，但具有较强的肽聚糖结合能力和异肽酶活性。LYZL6由睾丸和附睾分泌后定位于成熟精子头部的顶体后区域，可以参与精卵融合，并具有肽聚糖结合能力和异肽酶活性，提示LYZL6可能通过多种机制参与精子功能。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-12-22 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 对人源类溶菌酶蛋白6（human lysozyme-like protein 6，LYZL6）在受精过程中的作用进行研究，并对重组LYZL6蛋白（recombinant LYZL6，rLYZL6）的生理特性进行分析，从而揭示其生理功能。细胞免疫荧光法确定LYZL6定位于成熟精子头部的顶体后区域，反转录PCR（RT-PCR）分析表明精子表面的LYZL6蛋白来源于睾丸和附睾的分泌，Western blot法分析表明精子获能前后表面LYZL6的量无明显改变。半透明带结合实验和精子穿透实验分析表明兔抗LYZL6血清未明显抑制人精子结合透明带，但可明显抑制精卵融合。利用毕赤酵母表达系统成功表达了rLYZL6，使用甲壳素亲和层析和凝胶过滤层析可从发酵上清中纯化到具有生物活性的rLYZL6。酶联免疫吸附法（ELISA）分析显示rLYZL6不具有透明质酸结合能力、透明质酸水解能力和自由基清除活性，但具有较强的肽聚糖结合能力和异肽酶活性。LYZL6由睾丸和附睾分泌后定位于成熟精子头部的顶体后区域，可以参与精卵融合，并具有肽聚糖结合能力和异肽酶活性，提示LYZL6可能通过多种机制参与精子
分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2017-10-23 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 本试验旨在研究1～21日龄和1～42日龄罗斯308肉仔鸡对饲粮25羟基维生素D3（25-OH-D3）的适宜需要量。选取500只1日龄罗斯308肉仔鸡公雏，随机分成10个组，每组5个重复，每个重复10只鸡。10组肉仔鸡分别饲喂25-OH-D3水平为50、100、200、400、600、800、1 600、2 400、3 200和4 000 IU/kg的饲粮。试验期42 d。结果表明：1)饲粮25-OH-D3水平由50 IU/kg提高到600 IU/kg时，1～21日龄和1～42日龄肉仔鸡的体重、平均日增重和平均日采食量显著提高（P0.05）。2）饲粮25-OH-D3水平由50 IU/kg提高到600 IU/kg时，21日龄和42日龄肉仔鸡的骨骼（股骨、胫骨和跖骨）强度、重量、长度、灰分重量以及灰分、钙和磷含量显著提高（P0.05）。3）饲粮25-OH-D3水平由50 IU/kg提高到600 IU/kg时，21日龄和42日龄肉仔鸡的血浆钙含量显著提高（P0.05）。饲粮25-OH-D3水平对肉仔鸡的血浆无机磷含量无显著影响（P>0.05）。4）饲粮25-OH-D3水平由50 IU/kg提高到800 IU/kg时，11～14日龄和31～34日龄肉仔鸡的钙和总磷沉积率显著提高（P0.05）。综合本试验结果，以生长性能指标和骨骼参数为评价指标，采用折线回归模型分析得出，1～21日龄肉仔鸡饲粮25-OH-D3的需要量为476 IU/kg，1～42日龄肉仔鸡饲粮25-OH-D3的需要量为448 IU/kg。
分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2017-10-10 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 本试验旨在研究断奶时间及日龄变化对湖羊羔羊肌肉中脂肪酸组成的影响。试验选取体重[（3.51±0.57） kg]接近、健康状况良好的54只初生湖羊公羔，饲养至28日龄后屠宰6只。将剩余的48只按照同质性原则分为28日龄断奶组[（8.21±0.97） kg]和56日龄断奶组[（8.06±0.53） kg],每组24只。2组在42、56、70、84日龄分别屠宰6只，屠宰后测定羔羊背最长肌脂肪酸组成和瘤胃中氢化菌含量的影响。结果表明：1）56日龄断奶组肌肉中大部分脂肪酸的含量高于28日龄断奶组；随着日龄的增长羔羊肌肉中脂肪酸的含量逐渐升高，种类变得越来越多。2）70日龄时，28日龄断奶组的瘤胃中溶纤维丁酸弧菌含量显著高于56日龄断奶组（P<0.05）；56日龄断奶组溶纤维丁酸弧菌的含量在42日龄时显著高于70和84日龄（P<0.05）。由此可见，与28日龄断奶相比，羔羊在56日龄断奶更利于肌肉中脂肪酸的沉积。
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