分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-11-21 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 根据模仿葡萄球菌（Staphylococcus simulans）的溶葡球菌酶基因序列以及乳酸克鲁维酵母密码子偏好性设计引物扩增溶葡球菌酶基因表达片段，构建溶葡球菌酶（lysostaphin，Lys）基因表达载体（pKLAC1-Lys），转化乳酸克鲁维酵母（K. lactis GG799），实现了Lys基因的分泌表达。对重组菌株（K. lactis GG799/pKLAC1- Lys）进行NTG随机化学诱变，优化表达条件，筛选获得高表达菌株，并通过Ni-NTA亲和层析纯化蛋白并研究其酶学性质。结果表明：通过诱变重组溶葡球菌酶乳酸克鲁维菌株，Lys酶比活性提高了约5.2倍（约8000U/L）。最适接种量为40g/L，诱导过程中每24h添加一次终浓度为20g/L的半乳糖可提高酶比活性，最适表达pH为7.0-7.5，最适反应pH为7.0-8.0，最适反应温度为37℃。实验表明，低于40℃，pH 3-6之间时，重组溶葡球菌酶较稳定。Sr2+对其酶活性有明显的促进作用，Ba2+、Ca2+、Zn2+、Cu2+、Mn2+、Mg2+对其有明显的抑制作用。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-11-21 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 根据模仿葡萄球菌（Staphylococcus simulans）的溶葡球菌酶基因序列以及乳酸克鲁维酵母密码子偏好性设计引物扩增溶葡球菌酶基因表达片段，构建溶葡球菌酶（lysostaphin，Lys）基因表达载体（pKLAC1-Lys），转化乳酸克鲁维酵母（K. lactis GG799），实现了Lys基因的分泌表达。对重组菌株（K. lactis GG799/pKLAC1- Lys）进行NTG随机化学诱变，优化表达条件，筛选获得高表达菌株，并通过Ni-NTA亲和层析纯化蛋白并研究其酶学性质。结果表明：通过诱变重组溶葡球菌酶乳酸克鲁维菌株，Lys酶比活性提高了约5.2倍（约8000U/L）。最适接种量为40g/L，诱导过程中每24h添加一次终浓度为20g/L的半乳糖可提高酶比活性，最适表达pH为7.0-7.5，最适反应pH为7.0-8.0，最适反应温度为37℃。实验表明，低于40℃，pH 3-6之间时，重组溶葡球菌酶较稳定。Sr2+对其酶活性有明显的促进作用，Ba2+、Ca2+、Zn2+、Cu2+、Mn2+、Mg2+对其有明显的抑制作用。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-07-24 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 溶葡球菌酶（lysostaphin，Lys）是采用基因克隆技术使溶葡球菌酶基因实现外源表达所产生的蛋白。它是Zn2+依赖的金属蛋白酶，具有肽链内切酶活性，能专一性地水解葡萄球菌细胞壁Gly五肽桥联，使金黄色葡萄球菌（特别是MRSA）细胞壁破裂，达到溶菌杀菌作用，而不产生耐药性。作为一种抗菌剂，在兽药与临床等领域具有巨大的应用潜力。综述了溶葡球菌酶的来源、作用机理、不同表达系统及前景与展望。
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