单宁酶水解石榴皮多酚的工艺优化及酶解产物鉴定

分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2017-11-08 合作期刊: 《动物营养学报》

孙雨晴 陶 新 徐子伟

摘要： 从石榴皮中提取的多酚具有抗炎、抗氧化、抗癌等多种生物活性，但是其中的大分子的鞣花单宁如安石榴苷（PG）不能被动物胃肠道直接吸收，需要先水解成小分子物质如鞣花酸（EA）才能被吸收进入血液来发挥其生物功能。本试验利用单宁酶将石榴皮多酚中的大分子单宁（相对分子质量>500）水解为小分子酚酸，旨在优化酶解工艺及产物纯化工艺，阐明酶解前后石榴皮多酚在成分上的变化，为石榴皮多酚作为促进动物健康的功能性饲料添加剂的开发利用提供基础数据。通过比较单宁酶水解前后石榴皮多酚的高效液相色谱指纹图谱，确定PG降解率和EA生成率为水解程度检测指标后，利用单因素试验和正交试验优化酶解条件。通过静态吸附和动态吸附试验确定大孔树脂纯化条件，并用液相色谱-质谱联用技术鉴定酶解前后石榴皮多酚在成分上的变化。结果显示：最佳酶解条件为pH 5.2、温度45 ℃、加酶量30 mL/g底物、底物浓度4 g/L，时间16 h。最佳酶解产物纯化条件为D101型大孔树脂，95%乙醇为洗脱剂，上样体积为300 mL，洗脱体积为120 mL。高效液相色谱检测显示原石榴皮多酚中含有43.64%的PG（相对分子质量1 084）、4.85%的EA（相对分子质量302），酶解产物中PG含量为0.00%、EA含量为45.73%。原石榴皮多酚中分析出7种主要多酚化合物，质荷比（m/z）分别为1 083、1 083、783、757、633、401、300，相对分子质量分布在302～1 084；酶解产物中分析出4个主要多酚化合物，m/z分别为600、300、291、247，相对分子质量分布在248～602。本试验利用单宁酶将含大量以PG为主的鞣花单宁的石榴皮多酚水解成富含小分子多酚EA的酶解产物，并优化建立了最佳酶解条件及酶解产物纯化条件，可为石榴皮多酚的开发及其在饲料生产中的应用提供基础数据。

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