分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2018-12-24 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 本试验旨在研究L-茶氨酸对过氧化氢（H2O2）诱导山羊瘤胃上皮细胞凋亡的保护作用。采集42日龄的湘东黑山羊的瘤胃组织进行原代细胞分离、培养、纯化。对照组采用完全培养基，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别在完全培养基中添加800 µmol/L H2O2、4 mmol/L L-茶氨酸+800 µmol/L H2O2、8 mmol/L L-茶氨酸+800 µmol/L H2O2和16 mmol/L L-茶氨酸+800 µmol/L H2O2，每组3个重复。培养12 h后，采用噻唑蓝（MTT）法检测细胞存活率，采用流式细胞术检测细胞周期，采用实时定量PCR法和蛋白质印迹（Western blot）法检测Bax和Bcl-2基因及其蛋白的表达。结果表明：L-茶氨酸能显著提高H2O2损伤的瘤胃上皮细胞存活率（P<0.05），显著增加S期细胞比例（P<0.05），显著降低Bax基因和蛋白表达量（P<0.05），显著提高Bcl-2基因和蛋白表达量（P<0.05），显著提高Bcl-2和Bax基因和蛋白表达量的比值（P<0.05）。结果提示，L-茶氨酸能通过抑制细胞凋亡来有效地保护由H2O2导致的瘤胃上皮细胞损伤；体外条件下，培养液中添加的L-茶氨酸浓度高于8 mm/L时能有效发挥抗凋亡作用。
分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2017-10-23 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 本试验通过建立过氧化氢（H2O2）诱导山羊瘤胃上皮传代细胞凋亡模型，研究L-茶氨酸对H2O2诱导山羊瘤胃上皮传代细胞凋亡比率及其凋亡通路关键基因表达量的影响。选取42日龄湘东黑山羊的瘤胃上皮传代细胞，培养于含5%胎牛血清（FBS）的DMEM/F12培养基中，待细胞密度达到60%～70%时，随机分为5组，分别为培养基中无额外添加物的对照组、添加800 µmol/L H2O2的Ⅰ组、添加800 µmol/L H2O2+4 mmol/L L-茶氨酸的Ⅱ组、添加800 µmol/L H2O2+8 mmol/L L-茶氨酸的Ⅲ组和添加800 µmol/L H2O2+16 mmol/L L-茶氨酸的Ⅳ组，每组3个重复。作用12 h后，应用流式细胞术（FCM）检测山羊瘤胃上皮传代细胞凋亡比率，并采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）对山羊瘤胃上皮传代细胞凋亡通路关键基因半胱氨酸天冬氨酸-3（Caspase-3）、半胱氨酸天冬氨酸-8（Caspase-8）、半胱氨酸天冬氨酸-9（Caspase-9）、Fas相关死亡域蛋白（FADD）和凋亡酶激活因子（Apaf-1）的表达量进行检测。结果显示：1）通过膜联蛋白-V（annexin V）/碘化丙啶（PI）联合染色结果可知，与Ⅰ组相比，各L-茶氨酸添加组（Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组）细胞晚期凋亡比率显著降低（P＜0.05），且细胞晚期凋亡比率随L-茶氨酸添加浓度的增加逐渐降低。2）通过PCR检测结果可知，与Ⅰ组相比，各L-茶氨酸添加组Caspase-3、Caspase-9、Apaf-1基因的表达量皆显著降低（P＜0.05）。由此得出，L-茶氨酸对H2O2引起的山羊瘤胃上皮传代细胞凋亡具有一定的保护作用，该结果可为今后研究反刍家畜瘤胃氧化应激损伤机制提供技术支持和理论参考。
分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2017-10-11 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 本试验通过建立过氧化氢(H2O2)诱导山羊瘤胃上皮传代细胞凋亡模型，研究谷氨酰胺（Gln）、甘氨酰谷氨酰胺（Gly-Gln）和丙氨酰谷氨酰胺（Ala-Gln）对凋亡细胞的凋亡率及Bcl-2、Bax基因表达量的影响。选用60日龄湘东黑山羊的瘤胃上皮传代细胞，采用不同浓度[0(对照组)、100、400、800 µmol/L]的H2O2培养细胞，应用流式细胞术检测细胞凋亡情况。传代瘤胃上皮细胞分为5组，对照组和1组分别添加0、800 µmol/L H2O2，2组、3组、4组均添加800 µmol/L H2O2，同时分别添加17.28 mmol/L Gly-Gln（2组）、16.0 mmol/L Gln（3组）、16.0 mmol/L Ala-Gln（4组），应用流式细胞术检测细胞凋亡情况，同时采用实时荧光定量PCR（FQ-PCR）法检测细胞Bcl-2、Bax基因表达量。结果显示：1）与对照组相比，当H2O2浓度增加到800 µmol/L时，早期凋亡的凋亡率显著增加（P＜0.05），而晚期凋亡的凋亡率随着H2O2浓度的增加呈现增加后减少的趋势，但相对于对照组，都呈显著增加（P＜0.05）。2）与对照组相比，4组晚期凋亡的凋亡率显著增加（P＜0.05），试验组早期凋亡的凋亡率均显著增加（P＜0.05）。3）与对照组相比，试验组Bcl-2/Bax均显著增加（P＜0.05）；与1组相比，2组、3组和4组Bcl-2/Bax均显著增加（P＜0.05），且2组显著高于3组、4组（P＜0.05）。综合得出，Gly-Gln对H2O2引起山羊瘤胃上皮细胞早期凋亡具有一定的保护作用。
分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2017-10-11 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 本试验通过建立过氧化氢(H2O2)诱导山羊瘤胃上皮传代细胞凋亡模型，研究谷氨酰胺（Gln）、甘氨酰谷氨酰胺（Gly-Gln）和丙氨酰谷氨酰胺（Ala-Gln）对凋亡细胞的凋亡率及Bcl-2、Bax基因表达量的影响。选用60日龄湘东黑山羊的瘤胃上皮传代细胞，采用不同浓度[0(对照组)、100、400、800 µmol/L]的H2O2培养细胞，应用流式细胞术检测细胞凋亡情况。传代瘤胃上皮细胞分为5组，对照组和1组分别添加0、800 µmol/L H2O2，2组、3组、4组均添加800 µmol/L H2O2，同时分别添加17.28 mmol/L Gly-Gln（2组）、16.0 mmol/L Gln（3组）、16.0 mmol/L Ala-Gln（4组），应用流式细胞术检测细胞凋亡情况，同时采用实时荧光定量PCR（FQ-PCR）法检测细胞Bcl-2、Bax基因表达量。结果显示：1）与对照组相比，当H2O2浓度增加到800 µmol/L时，早期凋亡的凋亡率显著增加（P＜0.05），而晚期凋亡的凋亡率随着H2O2浓度的增加呈现增加后减少的趋势，但相对于对照组，都呈显著增加（P＜0.05）。2）与对照组相比，4组晚期凋亡的凋亡率显著增加（P＜0.05），试验组早期凋亡的凋亡率均显著增加（P＜0.05）。3）与对照组相比，试验组Bcl-2/Bax均显著增加（P＜0.05）；与1组相比，2组、3组和4组Bcl-2/Bax均显著增加（P＜0.05），且2组显著高于3组、4组（P＜0.05）。综合得出，Gly-Gln对H2O2引起山羊瘤胃上皮细胞早期凋亡具有一定的保护作用。
分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2017-10-10 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 本研究旨在建立浏阳黑山羊瘤胃上皮细胞的体外培养模型，并对其周期分布、增殖和凋亡特点进行研究。试验采集60日龄浏阳黑山羊的瘤胃上皮组织，应用0.25%胰蛋白酶+0.02%乙二胺四乙酸（EDTA）消化法对山羊瘤胃上皮组织进行消化，得到单个的山羊瘤胃上皮原代细胞进行体外培养。通过倒置显微镜对原代和传代培养阶段细胞形态进行观察，采用细胞计数法检测细胞的生长活性，应用细胞免疫组化学方法对传代细胞进行鉴定，并用流式细胞术检测山羊瘤胃上皮传代细胞周期分布情况和凋亡比率。结果显示：1）经0.25%胰蛋白酶+0.02% EDTA消化获得的山羊瘤胃上皮原代细胞，培养1 d开始贴壁生长，2 d开始生长较快（对数期），呈典型的“波峰”状生长，3～4 d生长最为迅速，7 d生长速度平稳（平台期）。2）经免疫细胞化学方法的鉴定，细胞胞浆为黄褐色，即细胞角蛋白19呈阳性表达。3）膜联蛋白-V/碘化丙啶联合染色显示，随着培养时间的延长，细胞凋亡比率显著增加（P＜0.01）。结果表明，通过0.25%胰蛋白酶+0.02% EDTA的消化方法成功得到了山羊瘤胃上皮细胞，可为今后研究反刍动物瘤胃相关机制与功能提供模型。
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