分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-08-29 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 脂肪酶是一类重要的工业用酶，广泛应用于诸多工业领域。与游离脂肪酶、物理或化学固定化脂肪酶相比，全细胞脂肪酶具有制备简单、无需蛋白质提取纯化、天然固定化、稳定性及抗逆性更好、制备及设备成本较低等优点，因此以全细胞形式利用脂肪酶被誉为是最有前景的降低生物转化成本的方法之一，关于全细胞脂肪酶的研究一直是脂肪酶领域的热点。本文就全细胞脂肪酶的研究进展进行归纳和述评，包括野生型全细胞脂肪酶和基因工程全细胞脂肪酶，并对其未来研究方向做出展望，以期为后续研究提供有益参考。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-08-29 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 作为桉叶油的主要成分，桉叶素是具有多种生物活性的单萜化合物，被广泛应用于药品、食品及化妆品等领域。桉叶油主要从桉树叶提取，该过程耗费大量人力及自然资源，且容易污染环境。近年来,随着微生物代谢工程与合成生物学的快速发展,加上越来越多萜类生物合成途径得到解析，为桉叶素的绿色生产提供了新的途径。本文对桉叶素的生物合成途径、桉叶素合酶的结构与功能及近年来桉叶素的微生物合成进行了综述，并对利用微生物代谢工程合成桉叶素等单萜化合物的瓶颈问题及解决方案进行了探讨和归纳，为构建高产桉叶素等单萜微生物工程菌株提供参考。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-08-29 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的：探究miR-196a-5p对小鼠前体脂肪细胞增殖、分化的影响及其潜在的分子机制。方法：①构建小鼠肥胖模型，RT-PCR检测脂肪组织中miR-196a-5p表达量；②鸡尾酒法诱导3T3-L1前脂肪细胞分化，RT-PCR检测分化过程中miR-196a-5p的表达变化；③合成miR-196a-5p mimics和inhibitors转染3T3-L1细胞，以CCK8、EdU试剂盒检测miR-196a-5p对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响作用；④运用油红O染色、甘油三酯测定评估miR-196a-5p对3T3-L1细胞分化的影响；⑤RT-PCR检测miR-196a-5p对前脂肪细胞增殖、分化相关基因的影响；⑥ 结合前人文献，运用生物信息软件、荧光素酶报告系统对miR-196a-5p调控脂肪细胞分化的靶基因进行筛选和验证。结果：①miR-196a-5p在肥胖小鼠脂肪组织中高表达，在3T3-L1前脂肪细胞分化过程中先升高后下降；②与阴性对照组相比，mimics转染抑制了3T3-L1细胞增殖，inhibitors转染促进了3T3-L1细胞增殖；③ 与阴性对照组相比，mimics组积累了大量油红着色的脂滴，甘油三酯含量增多；而inhibitors组的脂滴少而小，甘油三酯含量相对降低；④与阴性对照组相比，mimics转染抑制了增殖标志基因Cyclin D1、Cyclin E、CDK2和CDK4表达，促进了分化标志基因PPARγ、C/EBPα、LPL、aP2等的表达；inhibitors转染则表现出与mimics转染相反的作用；⑤miR-196a-5p可显著抑制野生型MAP4K3和MAPK1 3'UTR荧光素酶活性，而突变绑定位点可废除该抑制效应。结论：miR-196a-5p不仅可抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖，还可促进其诱导分化、沉积脂滴；miR-196a-5p可能通过靶向调节MAP4K3和MAPK1来介导3T3-L1前脂肪细胞分化。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-08-29 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 为制备Cancer testis 55（CT55）单克隆抗体，需构建带有人源CT55片段的原核表达质粒，把该质粒转化Rosetta感受态进行原核表达并得到目的蛋白，蛋白被纯化后免疫6w雌性BALB/c小鼠。按传统的单克隆抗体的制备方法，取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞（sp2/0）进行融合，经ELISA方法筛选及两次连续亚克隆，共获得多株能稳定分泌抗 CT55蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞，如3D8B7B12、4C8E1C9、3D8C10G9等。ELISA及Western Blot（WB）分析结果表明，筛选的细胞株均能产生单克隆抗体，且该抗体均分别能与原核表达及真核表达的CT55蛋白发生特异性结合。单克隆抗体可用于免疫荧光试验，且与P53发生互作的荧光主要位于细胞核边缘。结果表明，本研究成功制备了针对人源CT55 蛋白的单克隆抗体。CT55蛋白单克隆抗体的制备为今后肝癌、胃癌、结肠癌等癌症的快速的病原学诊断以及 CT55蛋白的结构和功能研究奠定了物质基础。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-08-29 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 近年来，以小分子化合物为半抗原的免疫分析技术在食品药品、环境保护等领域已有诸多应用，并取得了较为理想的检测效果。小分子化合物只能与载体偶联形成人工抗原后，方能借助T细胞表位间接诱导B细胞进行增殖与分化，进而产生特异性抗体。高效的人工抗原的合成是保证免疫分析的前提和关键，本文就近年来国内外有关人工抗原合成过程中所涉及的小分子半抗原的设计与合成方法、载体的选择、半抗原与载体的偶联方法、人工抗原的纯化及鉴定方法等进行综述。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-08-29 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 从烟台海滨水域分离出一株海洋单细胞微藻。通过形态学鉴定和18S rDNA基因序列分析确定该株真核微藻属于四爿藻属（Tetraselmis sp.），命名为138号藻种。利用Central Composite法的Box-Behnken实验设计优化了此藻株的原生质体备条件。获得了以原生质体制备率为目标函数的三元二次回归方程：Y1=88.30-0.19X1+2.44X2+2.28X3-0.95X1X2-3.13X1X3+3.78X2X3-9.85X12-7.95X22-7.22X32。得到最优制备条件：混合酶比例纤维素酶：果胶酶为5:2；混合酶浓度为4.5%（纤维素酶浓度为2.7%，果胶酶浓度为1.8%），；缓冲液pH为6.4，最高理论制备率81.5%。经过3次平行试验，实际得到的原生质体制备率为80.5%，与模型预测值的误差为1.24%。绿色荧光蛋白报告基因瞬时表达检测了所制备原生质体的转化能力。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-08-29 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的：建立一种高效噬菌体文库构建方法，获得抗鸡卵清蛋白（ovalbumin, OVA）的单链抗体（scFv）噬菌体展示文库，筛选鉴定获得OVA单链抗体。方法：用OVA蛋白免疫Balb/C小鼠，选取血清抗体效价高的小鼠提取脾脏RNA，利用RT-PCR方法扩增获得小鼠重链和小鼠轻链基因。通过无缝连接酶一步将小鼠重链基因、轻链基因和linker DNA连接起来，插入噬菌体表达载体中，构建OVA scFv噬菌体展示文库。测定文库容量，对文库进行富集筛选，ELISA鉴定阳性克隆，测序后构建真核表达载体，转入Expi-CHO悬浮细胞进行真核表达，利用Western blot进行鉴定。结果：成功获得库容量为1.2×107cfu的OVA scFv噬菌体展示文库，并从中筛选出8个阳性克隆，选取效价最高的2号克隆，在Expi-CHO悬浮细胞中表达获得可溶性抗体。结论：本研究建立了一种高效构建scFv噬菌体文库的方法，筛选获得高结合活性的OVA单链抗体，并成功进行了真核表达，为OVA ELISA检测试剂盒的研制奠定了基础。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-08-13 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的：从产品开发角度分析PD-1/PD-L1单抗的发展现状和未来趋势。方法：检索科睿唯安（Clarivate Analytics）的Cortellis数据库的数据，利用定量分析法和对比分析法对检索结果进行分析。结果：目前已有5种PD-1/PD-L1单抗上市，4种PD-1/PD-L1单抗处于预注册及6种处于临床Ⅲ期，未来市场上的PD-1/PD-L1单抗将呈现快速增长趋势。此外，PD-1/PD-L1单抗的商业交易也越来越多，目前共发生包括药物开发及商业化许可、专利资产出售以及早期药物研发合作等10余起交易，其中药物开发及商业化许可是最主要的交易模式。结论：虽然PD-1/PD-L1单抗市场尚处于起步阶段，但随着未来技术的不断发展改进，相信未来有更多的PD-1/PD-L1单抗上市，为癌症及其他疾病的治疗提供新的契机。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-08-13 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 对一株解淀粉芽孢杆菌TF28产生的抗菌脂肽进行分离鉴定及抑菌活性研究，采用酸沉淀、乙酸乙酯和甲醇萃取技术制备了抗菌脂肽粗提物，经过2次HPLC分离纯化，在保留时间32-42min内获得8个抗菌脂肽纯品，经MALDI-TOF-MS鉴定为芬芥素（fengycins），对尖孢镰刀菌和禾谷镰刀菌显示较强的抑菌活性，该研究为提高菌株TF28抗菌脂肽产量的定向遗传改造奠定基础。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-08-13 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 端粒是染色体末端的特殊结构，对染色体具有保护作用，并且和衰老及很多疾病相关。长链非编码RNA是长度大于200bp且一般不具有编码功能的RNA。TERRA（telomeric repeat-containing RNA）是由端粒重复序列转录的一类长链非编码RNA，研究表明TERRA具有参与调控端粒长度，促进异染色体形成和保护染色体末端等功能，并且TERRA的表达与疾病和衰老相关。由于TERRA对于端粒具有重要作用，因此对于TERRA的研究已经成为端粒相关研究中的热点。目前对于TERRA的转录调控及生物学功能已有较为深入的了解。现对TERRA的生物学特性，功能和与疾病及衰老的关系进行综述，以期为TERRA后续的研究如作为疾病治疗靶点，延缓衰老等提供参考。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-08-13 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 鉴于禽类细菌性疾病对养禽业健康发展的不利影响，人们急需开发改善细菌耐药性的新型敏感性抗菌药物，使其达到治疗细菌性疾病的目的。环肽较线性肽因具有更多的生物活性和医药价值而成为抗菌药物的候选者。本文主要从天然抗菌环肽的发现、抗菌环肽的合成、环肽类抗菌药物的应用现状三个方面进行综述，期望有利于读者进一步了解抗菌环肽的研究概况，为开发新型抗菌环肽药物提供帮助。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-08-13 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 优化并全合成里氏木霉几丁质酶基因，在毕赤酵母中实现分泌表达。产物几丁质酶的蛋白浓度达0.17 mg/mL，最适pH为5.6，最适温度为65 ℃，酶活为0.52 U/mL。该酶在50 ℃及以下较稳定。利用该酶水解低脱乙酰度壳聚糖并对产物的组成及结构进行分析。超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱（Ultra-performance liquid chromatography quadrupole time-of-flight mass spectrometry，UPLC-QTOF MS）检测及分析结果显示，酶解产物中包含至少41种聚合度2-18，不同脱乙酰度的壳寡糖组分；核磁共振（Nuclear magnetic resonance，NMR）检测及分析结果显示，产物壳寡糖的还原端主要为N-乙酰氨基葡萄糖，非还原端则同时含有N-乙酰氨基葡萄糖及氨基葡萄糖。相关结果可为壳寡糖的结构与功能关系研究提供参考。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-08-06 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 美国食品药品管理局批准了世界上第一个干细胞药物Prochymal。脐带间充质干细胞药物已被韩国食品药品管理局批准上市。脐带间充质干细胞制剂具有良好的临床应用前景，可用于治疗一些常规治疗手段无效或治疗效果不好的疾病，如系统性红斑狼疮、糖尿病、小儿自闭症、颅脑损伤、退行性关节炎以及膝关节软骨损伤等。脐带间充质干细胞制剂又称脐带间充质干细胞注射液，它的生产应遵循《药品生产质量管理规范》（GMP）的基本原则、相关规定和规范性文件以及其他一些要求，对生产流程的各个环节也有严格要求。脐带间充质干细胞制剂的生产流程包括脐带采集、分离纯化、干细胞鉴定、规模化扩增、注射液配制、分装、包装、贴标签等一系列步骤，最后生产出来的脐带间充质干细胞制剂产品需要保存在-196℃液氮中，使用前再进行复苏。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-08-06 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： R2R3-MYB类转录因子参与调控植物初生和次生代谢。本研究从中间锦鸡儿（Caragana intermedia）干旱转录组数据库中搜索并克隆了一个R2R3-MYB基因，命名为CiMYB15（GenBank登录号MH678649）；将CiMYB15基因编码区转入野生型拟南芥中，利用分光光度法测定了野生型和转基因拟南芥中总黄酮含量，并用qRT-PCR检测了转基因植物中AtCHS基因的表达情况。同时采用染色体步移法克隆了CiMYB15基因的启动子序列。结果表明：（1）CiMYB15基因gDNA长度为1960 bp，包含三个外显子（134、131和521 bp）和两个内含子（281和893 bp）；开放阅读框长度为786 bp，编码262个氨基酸。（2）克隆得到1580 bp的启动子序列，序列中主要包含损伤诱导元件G-box和P-box、盐诱导作用元件GT1-motif、参与干旱诱导的反应元件MBS，以及真菌侵害应答元件BOX-W1、植物-病原菌互作元件EIER；此外，还包含调节黄酮合成基因的MYB转录因子的结合位点。（3）CiMYB15基因的表达受到紫外胁迫的诱导。（4）CiMYB15基因过表达株系的总黄酮含量高于野生型。（5）过表达植物中AtCHS基因的表达量亦高于野生型。以上结果说明，CiMYB15基因正调控拟南芥黄酮代谢。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-08-06 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 以‘贵长’猕猴桃叶片为外植体，直接脱分化产生不定芽，并对不定芽增殖以及生根体系进行优化，建立了其高效直接再生体系。结果表明，叶片在MS+4.0 mg/L #31;6-BA+0.4 mg/L NAA培养基中，不定芽诱导率达95.8 %，平均出芽数达15.7个/叶片；不定芽在MS+3.0 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA+0.2 mg/L GA3培养基中，增殖率达100 %，且1～6代平均繁殖系数达8.15；不定芽先在添加1.0 mg/L IBA的1/2 MS固体培养基中诱导7 d，然后再先后在1/2 MS固体培养基和充分吸附1/2 MS培养液的珍珠岩中各培养14 d，生根率达98.61 %，且根系发育良好；50株试管苗移栽到以珍珠岩和田间土壤（其体积比为1:4）为基质的营养钵中，2周后成活49株，成活率达98 %。该研究成功建立了‘贵长’猕猴桃叶片高效再生体系，该方法不定芽诱导周期短，出芽率高且数目多，不定芽增殖系数大，生根率高且试管苗根系发达，为‘贵长’猕猴桃离体快速繁殖和遗传转化奠定了基础。
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