分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-07-01 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 食品安全一直是全世界公众健康的关注焦点。环介导等温扩增（Loop-mediated isothermal amplification，LAMP）技术是一种特异性强、灵敏度高、快速简便的等温核酸扩增技术，近年来在核酸检测领域有着广泛的研究和应用。将LAMP技术应用到食品安全检测领域，可以快速准确的监控一些食品安全问题对人类健康所构成的危害。因此针对LAMP技术在食品安全检测方面的优势进行分析，并结合LAMP技术与新兴诊断技术平台的联合运用进行了展望。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-12-22 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 酸脱氢酶具有重要的意义。为了获得理想的R-扁桃酸脱氢酶，本研究采用基因组挖矿技术从Lactobacillus harbinensis菌株中获得了一个新型的R-扁桃酸脱氢酶LhDMDH，重组LhDMDH的比酶活高达1264.3 U/mg，约为探针的4倍，在已报道的R-扁桃酸脱氢酶中处于领先水平。同时，考察了4个重组酶主要的酶学特性，它们的最适反应温度在25~30℃，最适反应pH在9.0~9.5。动力学参数的结果表明，LhDMDH对底物的Kcat值为30.28 S-1，明显高于其它重组酶。此外，底物谱分析的结果也表明LhDMDH在外消旋扁桃酸的手性拆分及苯乙酮酸的生物合成中更具优势。本研究在R-扁桃酸脱氢酶基因挖掘方面取得了较为理想的结果，为进一步的改造及应用奠定了坚实的基础，也为其它酶的挖掘提供了可资借鉴的经验。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-11-21 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 中肠是家蚕的消化器官，也是抵御外界病源入侵的生理屏障。为克隆和鉴定新的家蚕中肠特异启动子，首先利用RT-PCR检测家蚕组织特异表达候选基因BmP56的表达特性，发现其只在中肠组织表达。进一步克隆该基因上游调控序列P56，构建由该序列驱动红色荧光蛋白基因DsRed表达的转基因载体pBac[P56DsRedSV40，3×P3EGFP]，经显微注射和荧光筛选获得转基因家蚕。表达分析显示，报告基因DsRed只在转基因家蚕中肠组织表达，与BmP56的表达特征一致，说明克隆的上游调控序列P56是有活性的家蚕中肠特异启动子。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-11-21 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 低温CPC乙酰化酶在7-ACA的生物合成中具有重要作用和显著的优势，开发低温CPC乙酰化酶具有重大的经济价值。为了获得在低温下具有更高催化活性的CPC乙酰化酶，本文在前期的研究基础上，以先前获得的CA IIIM为亲本，借助分子对接的手段确定了它的底物结合区域，并利用pyMOL软件找出了底物结合区域Loop上关键的脯氨酸残基，分析后将选定的脯氨酸用甘氨酸进行替换。借助pET32a质粒在E. coli BL21(DE3)中进行了可溶性表达研究，除P272G外，其它突变体均实现了可溶性表达。P238G、P582G和P679G在13℃对CPC的催化活性分别为1.25、1.04和1.38 U/mg，较亲本的0.85 U/mg有了显著的提高。此外，分别考察了亲本及突变体的温度稳定性，它们之间无明显的差异。然后，在13℃下进行了7-ACA低温生物合成的研究，结果表明反应24 h后CPC的转化率也能达到80%以上。本研究在CPC乙酰化酶冷适应性改造方面取得了较为理想的结果，为进一步的改造及应用奠定了坚实的基础，也为其它低温酶的创制提供了可资借鉴的经验。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-11-21 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 中肠是家蚕的消化器官，也是抵御外界病源入侵的生理屏障。为克隆和鉴定新的家蚕中肠特异启动子，首先利用RT-PCR检测家蚕组织特异表达候选基因BmP56的表达特性，发现其只在中肠组织表达。进一步克隆该基因上游调控序列P56，构建由该序列驱动红色荧光蛋白基因DsRed表达的转基因载体pBac[P56DsRedSV40，3×P3EGFP]，经显微注射和荧光筛选获得转基因家蚕。表达分析显示，报告基因DsRed只在转基因家蚕中肠组织表达，与BmP56的表达特征一致，说明克隆的上游调控序列P56是有活性的家蚕中肠特异启动子。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-11-21 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 低温CPC乙酰化酶在7-ACA的生物合成中具有重要作用和显著的优势，开发低温CPC乙酰化酶具有重大的经济价值。为了获得在低温下具有更高催化活性的CPC乙酰化酶，本文在前期的研究基础上，以先前获得的CA IIIM为亲本，借助分子对接的手段确定了它的底物结合区域，并利用pyMOL软件找出了底物结合区域Loop上关键的脯氨酸残基，分析后将选定的脯氨酸用甘氨酸进行替换。借助pET32a质粒在E. coli BL21(DE3)中进行了可溶性表达研究，除P272G外，其它突变体均实现了可溶性表达。P238G、P582G和P679G在13℃对CPC的催化活性分别为1.25、1.04和1.38 U/mg，较亲本的0.85 U/mg有了显著的提高。此外，分别考察了亲本及突变体的温度稳定性，它们之间无明显的差异。然后，在13℃下进行了7-ACA低温生物合成的研究，结果表明反应24 h后CPC的转化率也能达到80%以上。本研究在CPC乙酰化酶冷适应性改造方面取得了较为理想的结果，为进一步的改造及应用奠定了坚实的基础，也为其它低温酶的创制提供了可资借鉴的经验。
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