分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2019-01-17 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 外泌体是细胞内源性囊泡样生物纳米级膜结构，直径大小在40-100 nm之间，可由各种类型的细胞分泌释放。外泌体具有许多功能，如蛋白质、mRNA、miRNA和脂类的细胞间运输和传递，以及抗原递呈，还可能具有致癌的能力。肿瘤细胞所分泌释放的外泌体在肿瘤的发生、发展以及迁移等生理和病理过程中发挥重要的作用。目前从肿瘤外泌体中寻找特异性标志物已成为肿瘤研究者重点关注的方向，对肿瘤早期诊断、疗效评价和预后分析具有重要的意义。本文作者就近年来外泌体在肿瘤研究和诊断中研究进展进行综述。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2019-01-17 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 通过目的基因的随机整合方式，构建得到的CHO表达细胞系，常会因为目的基因插入到染色体内不稳定区域，而在长期传代过程中出现表达不稳定的现象，这主要是由于位点效应所导致。为了解决这个问题，现利用CRISPR/Cas9技术介导的同源重组，将目的基因直接整合于CHO细胞染色体上稳定表达区域，以克服位点效应带来的CHO表达细胞系的长期表达不稳定。现总共利用该技术获得了2株外源基因（人白蛋白基因）定点整合细胞系；western blot结果显示，细胞上清液的产物具有人白蛋白抗原性；细胞在贴壁状态下，两株细胞系在第3、12、23、35、50代，细胞每日表达的HSA质量接近，且均维持在0.5 pg/cell/day；选取一株表达细胞系，经悬浮驯化后，在批次条件培养下，第1、25及50代的悬浮细胞，在摇瓶内的表达浓度均稳定在13-14 mg/L。本研究显示了将外源基因基因定点整合于CHO细胞基因组内的的可行性；且外源基因整合在稳定表达区域后，重组细胞系具有对外源基因长期表达的稳定性。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2019-01-17 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 环氧化物水解酶能够对外消旋环氧化物进行动力学拆分保留单构型的环氧化物。测定了菜豆环氧化物水解酶 (PvEH1) 针对苯基缩水甘油醚及其甲基衍生物的催化特性，并基于分子对接及多序列比对分析确定7个突变位点，通过单点和组合突变对PvEH1进行改造，以期改善PvEH1对邻甲基苯基缩水甘油醚 (1a) 的催化特性。底物谱分析表明PvEH1对1a的催化活性 (157.2 U/g湿细胞) 和对映选择性 (E = 5.6) 最高。单点突变结果显示E. coli/pveh1L105I和E. coli/pveh1V106I对1a的催化活性和对映选择性均有明显提高；L105I和V106I位组合突变菌株E. coli/pveh1L105I/V106I的催化活性 (493.8 U/g湿细胞) 是E. coli/pveh1的3.1倍，对映选择性 (E = 8.3) 也提高至E. coli/pveh1的1.5倍。纯化后PvEH1L105I/V106I的催化活性为17.6 U/mg是PvEH1的1.5倍，对1a的催化效率提高至PvEH1的2.1倍。SDS-PAGE分析表明提高了蛋白的可溶性表达量。利用E. coli/pveh1L105I/V106I全细胞催化100 mmol/L 1a水解动力学拆分获得手性纯 (R)-1a (ee > 96%) 的产率和时空产率分别为31.2%和5.12 g/L/h，因此，在手性纯 (R)-1a的制备中，E. coli/pveh1L105I/V106I是一种颇具潜力的生物催化剂。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2019-01-17 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 肿瘤免疫治疗是通过调节机体的免疫功能来控制和杀伤肿瘤的一种治疗手段。针对免疫检查点的治疗等一系列临床突破使得肿瘤的免疫治疗受到了广泛重视。目前，抗体治疗和过继性细胞治疗是肿瘤免疫治疗的主要方式，但是这些方法仍具有副作用较强，实体瘤治疗难以实现，治疗费用高昂等缺点。因此改进和发展更加高效、安全、低成本的新技术仍十分必要。适配体是利用指数富集的配体系统进化技术筛选得到的单链寡核苷酸，有核酸“抗体”之称。适配体具有低免疫原性，组织穿透力强，易于化学合成与修饰等优势，且与其靶标的结合具有较好亲和力和特异性，可像抗体一样实现肿瘤的免疫治疗。本文对适配体在肿瘤免疫治疗相关技术中的新应用作一综述，主要包括基于免疫检查点的抗肿瘤作用、双特异性适配体的肿瘤免疫治疗、适配体靶向递送siRNA的肿瘤免疫治疗和适配体联合抗体的肿瘤免疫治疗几个方面。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2019-01-17 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 利用甲醇营养型毕赤酵母生产猪干扰素（pIFN-），诱导过程一般在高细胞密度、定值控制甲醇浓度于5-10 g/L下进行，此时、溶解氧浓度（DO）自然下降到接近于0的水平。如果高好氧的毕赤酵母长期处在高甲醇/低DO的诱导浓度环境会导致其代谢活性恶化；胞内甲醇积累严重；pIFN-表达生产效率低。为此，提出了一种甲醇周期诱导控制策略来强化pIFN-生产。先将甲醇控制于高浓度达7 h；再降低甲醇流加速率、将DO控制在~20%约4 h，一共重复6个循环。采用上述周期控制策略，毕赤酵母代谢活性可以长期维持在较高水平；胞内甲醇处于极低水平（≤ 0.003 g/g-DCW）、解除了甲醇毒性效应；pIFN-活性达到3.90×107 IU/mL的最高水平，是定值控制甲醇浓度时的1.86倍。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2019-01-17 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 固定化酶作为一种绿色高效的生物催化剂，其性能远超游离酶。目前酶的固定化技术适用范围仍然较小，酶的研究范围多停留在模型酶阶段，扩大固定化酶的研究范围具有十分重要的意义。金属有机骨架材料（MOFs）作为酶固定化的载体在近些年得到了广泛的探索，但是具有生物功能的酶-MOFs复合材料的许多特性仍有待挖掘。本文采用仿生矿化的合成方法将5-羟甲基糠醛氧化酶（HMFO）固定到以沸石咪唑酯（ZIF-8）为代表的MOFs材料中，制备得到一种新的生物催化剂HMFO@ZIF-8，扫描电子显微镜表征其形态区别于经典的菱形十二面体。采用考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度，计算得到酶的固定化效率达到89.0%。HMFO@ZIF-8催化5-羟甲基糠醛的转化率达到84.3%，收率和选择性均高于游离酶。本文拓展了MOFs固定化酶的研究范围，为研究其他生物大分子复合材料的生物催化剂提供一定的借鉴意义。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2019-01-17 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的：基于GC-FID法，对狂犬病疫苗生产过程中采用的β-丙内酯灭活剂进行了含量及稳定性研究。方法：气相色谱条件：采用Agilent DB-624（30 m×0.530 mm×3.00 μm）毛细管柱；升温程序：初始温度为80 ℃，保持1 min，以20 ℃/min的速率升温至200 ℃，保持3 min；色谱柱流量：3 mL/min；检测器温度：250 ℃；进样口温度：150 ℃；载气：氮气，线速度：25 cm/sec；进样量：1 μL，分流比为2:1，进样方式：手动进样。结果：以乙腈作为稀释剂，BPL在1:100～1:32000范围内线性关系良好（R2≥0.999）。在1:200、1:1000、1:8000 三个浓度水平下，加标回收率在95.04%～116.86%之间，相对标准偏差（RSD）为2.6%～3.2%，检测限为0.112 μg/mL。结论：该方法简便、专属性强、稳定且在室温条件下操作，大大降低了对试验条件和技术操作的要求，能够满足灭活狂犬病病毒工艺中对BPL检测的需求。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2019-01-17 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 细菌中普遍存在L/D型氨基酸，与L-氨基酸（L-AAs）不同，D-氨基酸（D-AAs）不参与蛋白质合成，而与细胞壁肽聚糖的合成有关，直接影响细菌细胞壁的形状、数量和强度。D-AAs在细菌表征、药物抑菌性、靶标确定等方面具有重要的作用。目前，外源添加D-AAs参与肽聚糖合成的机制已有一些研究进展，其荧光衍生物已应用于细菌可视化，特异性探测细胞壁形成/重塑、细菌生长和细胞形态。但D-AAs如何影响细菌生长及其抗逆性的机制尚未研究清楚。本文对D-AAs的研究现状进行了综述，重点介绍了D-AAs在细菌中的生物合成和参与细胞壁合成的机制，非典型D-AAs对细菌的调控以及在细菌可视化中的应用，并对D-AAs未来研究方向进行了展望。
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