分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-09-21 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的：构建携带金黄色葡萄球菌类肠毒素K（Staphylococcal Enterotoxin-like K, SElK）和绿色荧光蛋白（GFP）融合基因的工程菌，并对SElK-GFP融合蛋白进行初步生物学活性分析。方法：利用PCR和Overlap PCR克隆获得SElK-GFP融合基因，并插入pET28a表达载体中，通过菌落PCR，质粒双酶切及测序验证后，将构建成功的pET28a-SElK-GFP质粒转化到E.coli BL21菌株中进行诱导表达，通过 Ni+亲和磁珠试剂盒纯化获得SElK-GFP融合蛋白；并利用MTT法检测SElK-GFP刺激小鼠脾淋巴细胞增殖；ELISA法检测SElK-GFP尾静脉注射后小鼠血清中细胞因子IL-2和IFN-γ的分泌水平。结果：成功构建能够表达SElK-GFP融合蛋白的工程菌，纯化获得高纯度的SElK-GFP融合蛋白可观测到明显的绿色荧光，融合蛋白生物学活性分析表明，SElK-GFP能够呈剂量依赖性地显著刺激小鼠脾淋巴细胞增殖；同时ELISA检测发现SElK-GFP可显著增加小鼠血清中细胞因子IL-2及IFN-γ的分泌水平。结论：本研究成功克隆、表达及纯化获得高纯度的SElK-GFP融合蛋白，其不仅保留了SElK的超抗原活性，同时兼具GFP绿色荧光的可视性，为深入研究SElK生物学活性提供有利工具。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-09-21 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 形状记忆聚合物是由固定相和可逆相构成的具有在外界刺激条件下诱导形状改变特性的一类高分子智能材料。相较于传统的形状记忆合金与陶瓷，其具有特定的生物可降解性、更高的机械性能调控空间、更强的形变恢复能力及更优良的生物相容性。凭借材料特性，近阶段针对形状记忆聚合物在组织工程领域的应用研究愈发广泛，包括血管组织、骨骼肌组织、神经组织与骨组织等方面。文章综述近年来形状记忆聚合物在多种组织工程领域研究中的实验创新、技术突破与应用拓展，例如将其作为新型多孔血管支架、骨骼肌修复支架、神经修复导管与骨缺损填充物等。可预见随着技术和材料的不断发展，形状记忆聚合物在组织工程领域的应用将更加成熟。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-09-21 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的：下调脂肪特异性蛋白27（Fsp27）基因表达联合杨梅素干预，观察对3T3-L1细胞中脂质代谢的影响，并探究脂滴发生、发展变化的调控机制。方法：常规培养3T3-L1前脂肪细胞，采用“鸡尾酒”法诱导其分化为成熟脂肪细胞。脂质体法转染sh-Fsp27干扰载体，以杨梅素浓度为100 μmol/L的完全培养基干预成熟脂肪细胞72 h。油红O染色，观察脂滴形态及大小的变化；酶法测定细胞内甘油及甘油三酯的含量，观察细胞脂质代谢的变化。Western blot检测Fsp27、激素敏感性甘油三酯脂肪酶（HSL）、甘油三酯脂肪酶（ATGL）以及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路蛋白的表达。结果：1. 3T3-L1细胞诱导分化后，形态由纤维样变成圆形，并伴随有细胞体积的增大。2. 与对照组相比，杨梅素组和转染组细胞中甘油三酯含量下降，甘油含量升高（P<0.05）。与其他三组相比，联合干预组细胞中甘油三酯含量减少，甘油含量增加（P<0.05）。3. 与对照组相比，其余三组细胞内Fsp27蛋白的表达量均降低，ATGL和PPARγ的表达量升高（P<0.05）。另外，联合干预组和杨梅素组细胞内HSL的表达量和p-p38MAPK/ p38MAPK的比值均大于sh-Fsp27组和对照组（P<0.05）。结论：1. Fsp27基因沉默与杨梅素联合干预可以更大程度地促进脂肪分解代谢。2.杨梅素可通过激活MAPK信号通路，上调HSL和ATGL的蛋白表达来发挥其促脂解的作用；sh-Fsp27干扰载体通过调节PPARγ和Fsp27蛋白的表达，增加ATGL含量来加速脂肪分解。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-09-21 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 甾体药物是仅次于抗生素的全球第二大类药物，具有抗炎、抗过敏、调节内分泌等重要功效。对甾体母核特定位点进行有效的氧化修饰，是引入药效活性的关键。研究表明，P450酶是催化甾体特异性氧化的一类关键酶家族。目前，电子传递效率和催化特异性是限制P450酶催化功能的重要因素，会导致目标甾体产物产量低、副产物积累严重等问题。因此，本文将围绕提高P450酶的催化效率及特异性方面的研究工作，系统综述工程化P450催化甾体类物质的方法策略和相关研究进展，并对催化甾体化合物的P450酶的设计和优化的未来发展进行展望，为该方面工作的深入研究提供指导。
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