分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-12-16 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 近年来细胞穿膜肽（Cell-penetrating peptides，CPP）在生物医药领域广泛应用，它为生物分子的胞内递送提供了有效的策略。关注CPP在肿瘤治疗及疾病诊断中的作用，并重点介绍其在肿瘤靶向治疗和医学影像诊断中的应用及优势。同时，根据CPP在药物传递系统中的特点，改进CPP存在的不足，扩大其联合用药的可能性，这也成为CPP研究的热点。对CPP及其在肿瘤等疾病的诊断及治疗中的应用作一综述，并简述其优化及改进策略，以期促进CPP在临床中的应用。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-12-16 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 人类线粒体N-乙酰氨基葡萄糖转移酶（mitochondrial O-GlcNAc transferse, mOGT）通过其N端基质导向序列(matrix targeting sequence，MTS）定位于线粒体内膜上，mOGT的过表达将导致细胞的凋亡。蛋白质的O-GlcNAc修饰存在于绝大多数真核生物中，而酿酒酵母唯独缺乏该修饰途径。对人体mOGT过表达引起酿酒酵母生长缺陷的机理进行分析，期望利用该模型研究mOGT导致的细胞凋亡调控机制。在酿酒酵母细胞中表达人体mOGT及其截短序列发现：mOGT对酿酒酵母的生长抑制及细胞中的定位依赖于N端全长的MTS序列；MTS序列在酿酒酵母中共表达导致线粒体融合。MTS序列过表达的酿酒酵母菌可以作为研究mOGT引起细胞凋亡的模式细胞。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-12-16 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 萜类化合物具有可观的商业价值，但生产过程复杂，产量低，利用微生物异源合成萜类化合物已成为热点。谷氨酸棒状杆菌内含合成萜类色素的途径，具有异源合成萜类化合物的天然优势和研究前景。首次对谷氨酸棒状杆菌合成萜类化合物进行了综述，从萜类合成途径、关键酶和全局调控机制三个方面进行了途经介绍。概述了谷氨酸棒状杆菌中单萜、倍半萜、四萜类化合物的异源合成，并对利用谷氨酸棒状杆菌高效合成萜类化合物所需解决的问题进行讨论，为谷氨酸棒状杆菌高效合成萜类化合物提供建议。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-12-16 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 利用大孔吸附树脂DA-201为载体对海洋脂肪酶固定化，并探寻添加剂对固定化过程的影响。分别以NH4Cl、甘露糖和甘氨酸为添加剂，采用单因素和正交实验相结合的方法优化条件。结果显示，以NH4Cl为添加剂的最优条件：柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液pH 6.0，固定化温度30℃，载体投放量0.5g，NH4Cl浓度为25mmol/L，固定化时间3.0h，酶活力达到115.27U/g；比不含有添加剂的固定化酶固定化效率提高47.42%。以甘露糖为添加剂最有条件：磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液pH7.0，固定化温度35℃，载体投放量0.5g，甘露糖浓度10mmol/L，固定化时间4.5h；酶活力达到122.75U/g，比不含有添加剂的固定化酶固定化效率提高6.50%。以甘氨酸为添加剂的最优条件：磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液pH7.0，固定化温度20℃，载体投放量0.5g，甘氨酸浓度为25mmol/L，固定化时间7.5h；酶活力达到141.69U/g，比不含有添加剂的固定化酶固定化效率提高26.12%。采用不同添加剂对大孔吸附树脂DA-201的吸附固定化过程有较大影响，可以极大的提高吸附效率；同时发现缓冲液类型、pH、温度、添加剂浓度和固定化时间等对DA-201树脂吸附脂肪酶有很大影响，对后续吸附固定化工业酶研究有较好的参考价值。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-12-16 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 为了实现糖苷类物质的高效转化，将来源于副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei）TK1501β-葡萄糖苷酶基因连接于表达载体pET28a(+)上，在E. coli BL21中表达，重组酶经镍离子亲和层析分离得到纯酶，其相对分子量和比酶活分别为86.63 kDa和675.56 U/mg。最适作用温度和pH分别为30 ℃和6.5。 Mg2+和Ca2+对β-葡萄糖苷酶酶活抑制作用最小，Cu2+几乎使其丧失催化活性。其底物特异性较宽泛，对大豆异黄酮、栀子苷、水杨苷、七叶苷、虎杖苷、熊果苷均有降解作用。以β-pNPG为底物时，该酶的Km和Vmax分别为1.44 mM和58.32 mM s-1，催化系数kcat为3982 s-1。结果与分析表明来源于副干酪乳杆菌TK1501β-葡萄糖苷酶对水解大豆异黄酮和合成糖苷将会发挥重要作用。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-12-16 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 工程细胞的单克隆源性是保证产品质量的重要因素之一，因此得到了越来越多的重视。当前，药物审评机构要求报批单位采用合适的实验手段证明所使用细胞的单克隆源性。综述通过介绍生产用工程细胞株单克隆的挑选过程及诸如有限稀释法、ClonePix、流式细胞术等常用方法，讨论如何确保工程细胞的单克隆源性，以及在生物药品生产过程中，保证工程细胞单克隆源性的意义。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-12-16 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的：优化AMPs17重组蛋白的原核表达条件，分析重组蛋白的抗真菌活性。方法：比较不同的诱导温度(25 ° C, 28 ° C, 30 ° C, 32 ° C, 34 ° C)、异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导浓度（0.025、 0.05、0.1、0.3、0.5、0.8、1.0mmol·L-1）和诱导时间（12h、15h、18h、21h、24h）对AMPs17重组蛋白表达量的影响，筛选AMPs17重组蛋白的最佳表达条件；采用镍离子金属螯合剂亲和层析柱对重组蛋白进行纯化，SDS-PAGE电泳和ImageJ图像分析系统对表达结果进行分析，Western bolt对AMPs17重组蛋白鉴定，高效液相色谱分析重组蛋白的纯度，微量液体稀释法及菌落计数法检测其抗真菌活性。结果：在诱导温度为32℃、IPTG浓度为0.05mmol·L-1的条件下诱导培养15h，AMPs17重组蛋白的表达量最高且最为稳定；HPLC色谱仪分析显示AMPs17重组蛋白纯度可达到90％以上；优化后的AMPs17重组蛋白能有效抑制白色念珠菌的生长。结论：本研究优化了家蝇抗菌肽AMPs17的诱导表达条件，获得了高表达、稳定且具有抗真菌活性的蛋白，为后续抗菌机制及应用研究提供一定的实验基础。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-12-16 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的 本研究主要是mir-219通过对TGFBR2调控机制，介导ENDMT途径缓解急性心肌梗死的发展。方法 qRT-PCR检测AMI患者及AMI小鼠血清中miR-219的表达量；过microRNA靶基因数据库TargetScantargetscan进行筛选预测；荧光素酶报告基因法及qRT-PCR分析TGFBR2与miR-219的调控机制；我们通过心脏超声心动图检测AMI小鼠心肌注射miR-219慢病毒4周后的血分数（LVEF）；采用qRT-PCR检测心肌注射miR-219慢病毒的AMI小鼠中Nppa 的mRNA的表达量；通过Masson’s trichrome染色法检测小鼠四周后左心室纤维化变化；使用α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）对小鼠左室切片进行免疫组化分析；通过Western blot检测P-smad2、P-smad3及TGFBR2缺氧诱导蛋白磷酸化的表达水平。结果 miR-219对AMI有调控作用；miR-219可抑制TGFBR2的mRNA表达，而miR-219 inhibitor可以抑制这种下调效果，miR-219对TGFBR2具有抑制调控性；miR-219可抑制急性心肌梗死的进程，促进梗死心肌功能的恢复；miR-219能促进AMI小鼠心肌组织血管的新生和成熟，最终心脏收缩能力上升，心功能恢复；miR-219能抑制TGFBR2抑制EndMT途径，导致缓解AMI的病理进程。结论 miR-219能通过抑制TGFBR2影响EndMT途径，心肌纤维化减少，促进血管的新生和成熟，心功能恢复，抑制AMI的病理发展。
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