miR146a通过Smad4参与多柔比星的心肌细胞毒性作用

分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-06-01 合作期刊: 《中国生物工程杂志》

秦瑶 赵鸿彦 张文航 王冬梅

摘要： 目的 探讨miR146a参与多柔比星心肌细胞毒性作用的可能机制 方法 用多柔比星处理大鼠心肌细胞，用CCK-8方法检测细胞活力，用荧光定量PCR检测miR146a的变化，用western blot检测切割的Caspase 3的蛋白变化。使用常间回文重复序列丛集（clustered regularly interspaced short palindromic repeats，CRISPR）的方法，设计针对miR146a的向导RNA，敲除miR146a的表达。用CCK-8方法和western blot分别检测敲除细胞的活力和Caspase 3蛋白变化。用软件预测miR146a的靶基因，利用荧光素酶系统进行验证。用western blot检测多柔比星处理后靶基因的变化，以及用western blot检测敲除miR146a对靶基因变化的影响。 结果 多柔比星处理导致大鼠心肌细胞活力降低，切割的Caspase 3水平升高，同时发现miR146a表达升高（3.6倍）。使用CRISPR可有效敲除miR146a的表达，敲除效果显著高于microRNA decoy的效果（88.6% vs 57.6%）。敲除miR146a的细胞用多柔比星处理，miR146a增加不明显（1.08倍），并且敲除miR146a抑制了多柔比星导致的细胞活力降低和Caspase 3升高。经生物信息学及荧光素酶检测证实在大鼠心肌细胞内Smad family member 4（Smad4）是miR146a的靶基因，用多柔比星处理心肌细胞后，Smad4的表达降低。而敲除miR146a后，Smad4的表达升高，用多柔比星处理敲除miR146a的细胞，Smad4的表达变化不明显。 结论 大鼠心肌细胞中，miR146a通过调节Smad4的表达参与了多柔比星对细胞的毒性作用。

 点击量 19155  下载量 1637  评论