分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-05-23 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的：为真核表达猪白细胞介素17(IL-17)，研究产物在细胞培养下的免疫生物活性。方法：通过PCR扩增出猪IL-17基因并插入到真核表达载体pVAV1，然后转染到IPEC-J2细胞、HaCaT细胞和L02细胞中。在转染后第24、48和72h收集细胞，第48h收集上清液。收集细胞通过实时荧光定量PCR检测相关免疫基因的表达水平，收集上清液通过抑菌试验检测相关抗菌肽的生物活性。结果：采用pVAX1载体构建了表达猪IL-17的重组质粒，转染到细胞中。证实IL-17基因能诱导抗菌肽基因（RegⅢ、S100A8和BD2）的表达，显著上调JAK-STAT信号通路基因（JAK1、STAT1和STAT3）和细胞因子基因（IL-6、IL-12和TNF-α）的表达。此外，细胞上清液能够在不同程度上抑制大肠杆菌及金黄色葡萄球菌的增殖。结论：成功将猪IL-17基因真核表达，其表达产物能诱导效应细胞表达多种细胞因子，产生多种抗菌肽，具有抑菌能力；这为进一步研发猪IL-17作为抗菌免疫分子制剂奠定了初步基础。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-03-22 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的：在毕赤酵母SMD1168中表达融合抗菌肽，并检测其体外抑菌活性。方法：本实验从实验室先前构建的重组质粒pVAX1-RHKJT中克隆出已构建好的融合抗菌肽RHKJT基因片段，将RHKJT基因片段插入至pGAPZaA真核表达质粒中，通过PCR和测序验证，构建pGAPZα-RHKJT重组真核表达质粒，将线性化的pGAPZα-RHKJT电转化至毕赤酵母SMD1168中获得重组酵母SMDpG-RHKJT，并通过PCR和RT-PCR验证，对重组毕赤酵母SMDpG-RHKJT进行发酵，并收集发酵上清液进行体外生物活性测定。结果：成功获得重组酵母SMDpG-RHKJT菌株，重组酵母发酵上清液对大肠杆菌标准菌、大肠杆菌耐药菌、沙门氏菌标准菌、金黄色葡萄球菌标准菌、金黄色葡萄球菌耐药菌、肺炎链球菌标准菌均具有显著的抑菌活性。结论：重组酵母表达的融合抗菌肽具有较广的抗菌谱和较高的抑菌活性，具有良好的潜在应用前景。
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