分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-07-24 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： αB-晶状体蛋白属于小热休克蛋白蛋白家族，具有分子伴侣活性。在阿尔茨海默病大脑中，星形胶质细胞表达的αB-晶状体蛋白明显上调，并且这些上调的αB-晶状体蛋白紧密地分布在β-淀粉样蛋白沉积周围。为了在分子水平上研究胞外αB-晶状体蛋白在阿尔茨海默病中的作用机制，需要获得大量具有生物学活性的αB-晶状体蛋白。根据毕赤酵母密码子偏好性对人αB-晶状体蛋白基因进行优化，并在目的基因3’端加上6个组氨酸标签，优化后的基因克隆到巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）表达载体pPIC9K上；电转入毕赤酵母GS115中；优化确定最佳表达条件为：BMGY与BMMY的转接比为2:1，表达时间为72h，甲醇补加终浓度为0.5%；经Western-blotting鉴定，获得20kDa的目的蛋白，以及18.6kDa及13.1kDa两个个蛋白片段，重组目的蛋白出现了部分降解，纯化获得20 kDa目的蛋白；利用胰岛素还原法测定该片段具有分子伴侣活性，为进一步研究外源αB-晶状体蛋白在阿尔茨海默病中对星形胶质细胞的保护机制奠定基础。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-06-01 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： αB-晶状体蛋白属于小热休克蛋白蛋白家族，具有分子伴侣活性。在阿尔茨海默病大脑中，星形胶质细胞表达的αB-晶状体蛋白明显上调，并且这些上调的αB-晶状体蛋白紧密地分布在β-淀粉样蛋白沉积周围。为了在分子水平上研究胞外αB-晶状体蛋白在阿尔茨海默病中的作用机制，需要获得大量具有生物学活性的αB-晶状体蛋白。根据毕赤酵母密码子偏好性对人αB-晶状体蛋白基因进行优化，并在目的基因3’端加上6个组氨酸标签，优化后的基因克隆到巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）表达载体pPIC9K上；电转入毕赤酵母GS115中；优化确定最佳表达条件为：BMGY与BMMY的转接比为2:1，表达时间为72h，甲醇补加终浓度为0.5%；经Western-blotting鉴定，获得20kDa的目的蛋白，以及18.6kDa及13.1kDa两个个蛋白片段，重组目的蛋白出现了部分降解，纯化获得20 kDa目的蛋白；利用胰岛素还原法测定该片段具有分子伴侣活性，为进一步研究外源αB-晶状体蛋白在阿尔茨海默病中对星形胶质细胞的保护机制奠定基础。
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