X射线衍射晶体法解析脱卤酶DehDIV-R结构的研究

分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-05-23 合作期刊: 《中国生物工程杂志》

童超迪 吴坚平 杨立荣 徐刚

摘要： R-2-卤代酸脱卤酶能立体选择性水解R-2-卤代酸。解析酶的单晶结构对提高酶的选择性和活性提供了直接的结构指导，是目前酶结构领域研究的前沿。以实验室前期得到的来自假单胞菌ZJU26的R-2-氯丙酸脱卤酶（DehDIV-R）为研究对象，采用X射线衍射晶体法进行结构解析。采用ppSUMO载体融合表达DehDIV-R蛋白，依次通过Ni-NTA亲和层析、透析酶切、二次Ni-NTA亲和层析以及凝胶过滤层析纯化得到单一条带，且均一性好的蛋白。接着对结晶条件进行初筛与优化，得到的最佳结晶条件为0.1 mol/L HEPES pH 7，12% PEG 6000，0.2 mol/L MgCl2 ，8 mmol/L CHAPS。晶体在上海同步辐射光源BL18U1线站上收集衍射数据，采用分子置换法成功解析获得了分辨率为2.35 Å的DehDIV-R的晶体结构。Ramachandran图表明98.02%的氨基酸位于最适区，证明了该结构的合理性。DehDIV-R的纯化、结晶以及结构解析为进一步深入了解其结构和功能奠定了基础。

 点击量 2628  下载量 1416  评论