肝脏特异性CD36基因敲除小鼠的 制备及鉴定

分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-05-23 合作期刊: 《中国生物工程杂志》

苏春晓 张晓玉 曾晗 陈压西 阮雄中 杨萍

摘要： 目的 运用Cre/Loxp重组酶系统构建肝脏特异性CD36基因敲除小鼠并进行鉴定和验证，为研究CD36的生物学功能奠定基础。 方法 构建CD36打靶载体，电转转染胚胎干细胞，通过长链PCR筛选出正确同源重组的阳性克隆，阳性胚胎干细胞克隆经扩增后，注射入C57BL/6J小鼠的囊胚中，获得嵌合小鼠，再与Flp小鼠交配筛选获得Flox杂合子小鼠，该小鼠与引进的Alb-Cre小鼠交配，在F3代获得CD36fl/fl:Alb-Cre+基因型小鼠，即为肝脏特异性CD36敲除小鼠。采用PCR鉴定小鼠基因型，PCR、实时荧光定量PCR和Western blot验证小鼠肝脏CD36敲除效果，Western blot检测小鼠肾脏、脂肪和心肌组织CD36表达情况，HE染色观察小鼠肝脏形态学改变。 结果 建立了CD36基因的Flox杂合子小鼠，与Alb-Cre小鼠交配后，在F3代筛选出CD36fl/fl:Alb-Cre-和CD36fl/fl:Alb-Cre+基因型小鼠，DNA水平证实CD36fl/fl:Alb-Cre+基因型小鼠肝脏CD36基因通过Cre/Loxp重组酶系统被敲除。与CD36fl/fl:Alb-Cre-基因型小鼠相比，CD36fl/fl:Alb-Cre+基因型小鼠肝脏CD36mRNA和蛋白表达水平显著降低，肾脏、脂肪和心肌组织CD36蛋白表达无差别，肝脏形态学特征无明显差异。结论 通过Cre/Loxp重组酶系统成功构建了肝脏特异性CD36基因敲除小鼠，为研究CD36在肝脏代谢和肝脏疾病中的功能提供了动物模型

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