分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2017-11-07 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 本试验旨在构建不同纤维素酶的融合表达系统及探讨融合纤维素酶的酶学性质。利用PCR技术从实验室前期分离的枯草芽孢杆菌中分别扩增2个纤维素酶基因Cel42和Cel22，设计一段柔性接头（GSGGGS），通过酶切连接将2个纤维素酶基因构建在一个开放阅读框（ORF）内，插入到pET32a(+)中构建重组表达载体pET32a(+)-Cel42-Cel22，转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达，并对其酶学性质进行研究。结果表明：本试验成功克隆了2个纤维素酶基因Cel42和Cel22，并构建了重组表达系统BL21(DE3)/pET32a(+)-Cel42-Cel22，十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)估计其分子质量约为101 ku，粗酶液中葡聚糖内切酶活性为57.62 U/mL，葡聚糖外切酶活性为32.57 U/mL。试验所得融合纤维素酶Cel42-Cel22的最适反应温度为50 ℃，最适反应pH为6.0，温度在30～70 ℃范围内时可维持70%以上的纤维素酶活性，pH在4.0～9.0范围内时可保持75%以上的纤维素酶活性。除Mn2+外，其他金属离子对纤维素酶的活性均具有一定的抑制作用，其中Hg2+和Cu2+对的抑制作用较明显。由此可见，本试验在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达出了融合纤维素酶Cel42-Cel22，且该酶具有一定的活性，可适应较宽广的温度和pH范围，对金属离子敏感。
分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2017-11-07 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 为了研究湖羊肌肉营养特点及肌纤维组织学特性，分别测定了不同年龄（初生、断奶、成年）湖羊肌肉中常规营养成分（水分、粗蛋白质、粗脂肪、粗灰分、钙、磷）、18种氨基酸的含量以及不同年龄湖羊不同部位（臂三头肌、股二头肌、背最长肌）肌肉的肌纤维组织学特性（肌纤维直径、肌纤维密度）。结果表明：随着年龄的增长，肌肉中水分含量显著降低（P﹤0.05），粗脂肪、粗蛋白质、粗灰分、钙和磷的含量逐渐增加，且成年羊与初生羔羊和断奶羔羊之间差异显著（P﹤0.05）。湖羊肌肉中苏氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、组氨酸和精氨酸的含量随着年龄的增长而显著增加（P﹤0.05），非必需氨基酸含量随着年龄的增长大致呈增加趋势。在湖羊肌肉的所有氨基酸中含量最高的是谷氨酸，其次是天门冬氨酸。不同年龄湖羊的肌纤维直径均表现为背最长肌﹤股二头肌﹤臂三头肌，肌纤维密度均表现为背最长肌>股二头肌>臂三头肌，且同龄湖羊3个部位之间的肌纤维密度均差异显著（P﹤0.05）。相同部位的肌肉，其肌纤维直径随年龄的增长而增大，肌纤维密度随年龄的增长而减小，且不同年龄间差异显著（初生羔羊与断奶羔羊的臂三头肌除外）（P﹤0.05）。综上可知，湖羊肌肉营养丰富，氨基酸种类齐全，肌纤维组织学特性在不同年龄和不同部位间存在差异，断奶羔羊肉营养更丰富，更具香、嫩等特点。
分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2017-10-11 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 本试验旨在构建不同纤维素酶的融合表达系统及探讨融合纤维素酶的酶学性质。利用PCR技术从实验室前期分离的枯草芽孢杆菌中分别扩增2个纤维素酶基因Cel42和Cel22，设计一段柔性接头（GSGGGS），通过酶切连接将2个纤维素酶基因构建在一个开放阅读框（ORF）内，插入到pET32a(+)中构建重组表达载体pET32a(+)-Cel42-Cel22，转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达，并对其酶学性质进行研究。结果表明：本试验成功克隆了2个纤维素酶基因Cel42和Cel22，并构建了重组表达系统BL21(DE3)/pET32a(+)-Cel42-Cel22，十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)估计其分子质量约为101 ku，粗酶液中葡聚糖内切酶活性为57.62 U/mL，葡聚糖外切酶活性为32.57 U/mL。试验所得融合纤维素酶Cel42-Cel22的最适反应温度为50 ℃，最适反应pH为6.0，温度在30～70 ℃范围内时可维持70%以上的纤维素酶活性，pH在4.0～9.0范围内时可保持75%以上的纤维素酶活性。除Mn2+外，其他金属离子对纤维素酶的活性均具有一定的抑制作用，其中Hg2+和Cu2+对的抑制作用较明显。由此可见，本试验在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达出了融合纤维素酶Cel42-Cel22，且该酶具有一定的活性，可适应较宽广的温度和pH范围，对金属离子敏感。
分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2017-10-11 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 为了研究湖羊肌肉营养特点及肌纤维组织学特性，分别测定了不同年龄（初生、断奶、成年）湖羊肌肉中常规营养成分（水分、粗蛋白质、粗脂肪、粗灰分、钙、磷）、18种氨基酸的含量以及不同年龄湖羊不同部位（臂三头肌、股二头肌、背最长肌）肌肉的肌纤维组织学特性（肌纤维直径、肌纤维密度）。结果表明：随着年龄的增长，肌肉中水分含量显著降低（P﹤0.05），粗脂肪、粗蛋白质、粗灰分、钙和磷的含量逐渐增加，且成年羊与初生羔羊和断奶羔羊之间差异显著（P﹤0.05）。湖羊肌肉中苏氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、组氨酸和精氨酸的含量随着年龄的增长而显著增加（P﹤0.05），非必需氨基酸含量随着年龄的增长大致呈增加趋势。在湖羊肌肉的所有氨基酸中含量最高的是谷氨酸，其次是天门冬氨酸。不同年龄湖羊的肌纤维直径均表现为背最长肌﹤股二头肌﹤臂三头肌，肌纤维密度均表现为背最长肌>股二头肌>臂三头肌，且同龄湖羊3个部位之间的肌纤维密度均差异显著（P﹤0.05）。相同部位的肌肉，其肌纤维直径随年龄的增长而增大，肌纤维密度随年龄的增长而减小，且不同年龄间差异显著（初生羔羊与断奶羔羊的臂三头肌除外）（P﹤0.05）。综上可知，湖羊肌肉营养丰富，氨基酸种类齐全，肌纤维组织学特性在不同年龄和不同部位间存在差异，断奶羔羊肉营养更丰富，更具香、嫩等特点。
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