分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-11-08 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 摘要【目的】对美洲大蠊内生粘质沙雷氏菌几丁质酶ChiA基因进行克隆、可溶性表达及功能验证。【方法】PCR扩增ChiA基因，TA亚克隆，构建重组表达载体ChiA/pET21b，生物信息学分析和低温诱导表达、SDS-PAGE、Western-Blot鉴定，打孔法对几丁质酶活性检测。【结果】PCR成功扩增了ChiA基因序列，该序列与Gen Bank上的S．marcescens ChiA基因序列同源性达99%；该序列编码571个氨基酸，并能够在原核系统中稳定表达。可溶性表达分析显示：通过低温诱导表达，获得可溶性的目的蛋白；活性试验发现:含目的蛋白的表达产物可分解几丁质，且活性强于美洲大蠊内生粘质沙雷氏菌。【结论】从美洲大蠊内生粘质沙雷氏菌基因组中成功克隆了几丁质酶ChiA基因，通过原核表达系统获得了具有较强活性的可溶性几丁质酶ChiA，为其应用奠定了基础。
分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2017-10-10 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 本试验旨在研究亚麻籽油对脂多糖（LPS）刺激仔猪肝脏Toll样受体4（TLR4）和核苷酸结合寡聚化结构域（NOD）信号通路关键基因表达的影响。选取24头断奶仔猪，按体重相近原则随机分为4个组，分别为对照组、LPS组、2.5%亚麻籽油组（2.5%亚麻籽油+LPS）、5.0%亚麻籽油组（5.0%亚麻籽油+LPS），每组6个重复，每个重复1头猪，试验期21 d。试验组注射100 μg/kg体重的LPS，对照组注射等量的生理盐水。注射LPS或生理盐水4 h后屠宰仔猪，取肝脏，测定TLR4和NOD信号通路关键基因及相关炎性介质的mRNA表达水平。结果表明：1）LPS刺激显著提高了肝脏肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、环氧酶2（COX2）、热休克蛋白70（HSP70）的mRNA相对表达量（P<0.05），2.5%亚麻籽油可显著降低COX2、TNF-α的mRNA相对表达量（P<0.05），5.0%亚麻籽油可显著降低TNF-α的mRNA相对表达量（P<0.05）。2）LPS刺激显著提高了肝脏TLR4、髓样分化因子88（MyD88）、白细胞介素-1受体相关激酶1（IRAK1）、NOD1、NOD2、受体互作蛋白2（RIPK2）、核因子-κB（NF-κB）的mRNA相对表达量（P<0.05）；2.5%亚麻籽油可显著降低NOD1、NOD2的mRNA相对表达量（P<0.05），有降低RIPK2 mRNA相对表达量的趋势（P<0.10）；5.0%亚麻籽油可显著降低NOD2的mRNA相对表达量（P<0.05）。这表明LPS刺激导致仔猪发生炎症反应，亚麻籽油可能通过抑制NOD信号通路进而缓解肝脏炎症反应。
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